Development of enzyme-labeled oligonucleotide probe for detection of mecA gene in methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Abstract

A DNA hybridization method with an enzyme-labeled oligonucleotide probe (mecA-ELONP) was developed to detect the methicillin-resistant gene (mecA) in methicillin-resistant Staphylococcus aureus. For rapid identification, bacterial colonies were transferred from agar plates directly onto nylon membranes. Lysis of cells, denaturation of DNA, and hybridization were performed on the membranes. These procedures required only 3 h for completion. The results obtained by this test closely corresponded with those obtained by determining the MICs of oxacillin against S. aureus. The results of the mecA-ELONP also correlated well with those of a commercially available PCR test. Thus, mecA-ELONP proved to be a reliable and convenient method for the rapid identification of methicillin-resistant S. aureus, which could be useful in clinical microbiology laboratories.

Oxacillin Susceptibility Testing of Staphylococci Directly from Bactec Plus Blood Cultures by the BBL Crystal MRSA ID System

“…Tests were carried out on Mueller-Hinton agar incubated for 48 h at 30°C and on Mueller-Hinton agar supplemented with 5% NaCl and incubated for 24 h at 37°C. (ii) The genotypic assay used the oligonucleotide mecA probe (5Ј-AGAGTAGCACTCGAATTAGGCAGT-3Ј) previously described by Shimaoka et al (13). This probe was 5Ј labeled with [␥-32 P]ATP as described by Sambrook et al (12), and dot blot hybridization was performed as previously described (8).…”

Μελέτη μηχανισμού αντοχής στη methicillin στελεχών σταφυλόκοκκου από ασθενείς με ενδονοσοκομειακή λοίμωξη

“…Αντίστοιχες μελέτες για τους πηκτάση-αρνητικούς στα φυλόκοκκους δεν έχουν πραγματοποιηθεί μέχρι σήμερα.Τα ημιαυτόματα ή αυτόματα συστήματα εμφανίζουν ποικιλία στην ειδικότητα και την ευαισθησία, που κυμαίνεται από 72% για τους ανθεκτικούς στη μεθικιλλίνη πηκτάση-αρνητικούς σταφυλόκοκκους, έως 98,5% για τον S. aureus[88].Οι μοριακές τεχνικές παραμένουν οι πλέον ευαίσθητες και ειδικές μέθοδοι για την ανίχνευση της αντοχής στη μεθικιλλίνη[141]. Η ανίχνευση του γονιδίου mecA καθώς και των ρυθμιστικών γονιδίων μπορεί να γίνει με DNA υβριδισμό ή με την τεχνική της αλυσιδωτής αντίδρασης της πολυμεράσης[19,101,129,149]. Σήμερα, η εφαρμογή της αλυσιδωτής αντίδρασης της πολυμεράσης έχει αντικαταστήσει την τεχνική του υβριδισμού.…”