Development of insect resistance in tomato plants expressing the δ-endotoxin gene ofBacillus thuringiensis subsp.tenebrionis

Abstract

A crystal ~-endotoxin gene of Bacillus thuringiensis subsp, tenebrionis (B.t.t.) encoding a coleopteran insect-specific toxin was used to construct a chimeric gene which expressed the toxin in plant cells. Via an Agrobacterium tumefaciens binary vector system, the toxin gene was transferred into tomato cells. From leaf disks recombinant plants were regenerated. Hybridization experiments demonstrated that these plants synthesized toxin-specific mRNA of the expected size. Transgenic tomato plants with the chimeric B.t.t. toxin gene contained a 74 kDa protein which cross-reacted with toxin antibodies. The expression caused a significant insecticidal activity of the transgenic tomato plants against Colorado potato beetle larvae.

Avaliação da capacidade de regeneração in vitro em tomateiro industrial

“…Dez cotilédones aparados foram inoculados em placa de Petri. Conforme o protocolo aplicado por Rhim et al (1995), estabeleceu-se o método E (primeiras folhas cortadas), no qual os brotos foram enraizados e cultivados em meio MS (Murashige & Skoog, 1962), sem reguladores de crescimento, durante oito a dez dias. As primeiras folhas foram isoladas e cortadas em pequenos pedaços de 1 cm 2 , portando partes das nervuras principal e laterais.…”

“…Os seguintes meios de cultura foram utilizados: M0: macro e micronutrientes de Murashige & Skoog (1962), vitaminas de B5 de Gamborg et al (1968) suplementado com 30 g L -1 de sacarose e de 8 g L -1 de ágar-ágar, pH 5,8; M1: meio de cultura M0 suplementado com 1 mg L -1 de zeatina, e 30 g L -1 de glicose, conforme McCormick (1991); M2: as vitaminas do meio de cultura M0 foram substituídas por vitaminas de Nitsch & Nitsch (1969), suplementado com 2 mg L -1 de zeatina e 20 g L -1 de sacarose, de acordo com Redenbaugh et al (1992); M3: meio de cultura M0 suplementado com 2,5 mg L -1 de BAP e 0,2 mg L -1 de AIA, segundo Rhim et al (1995). Para a obtenção de brotos alongados, os explantes com gemas foram repicados três vezes para os meios de cultura listados abaixo, em intervalos que variaram entre quatro e seis semanas, de acordo com a intensidade do crescimento.…”

“…A mesma tendência foi observada na cultivar IPA-6. Dos explantes de primeiras folhas cortadas (método E), produziu-se apenas um pequeno núme- Rhim et al (1995). 3 A: decapitação (SDM, após Fári et al, 1995a); B: cotilédone fendido; C: cotilédone inteiro (McCormick, 1991); D: cotilédone aparado (Redenbaugh et al, 1992); E: primeira folha cortada (Rhim et al, 1995 Com relação ao alongamento de brotos após a indução de regeneração, com a aplicação de BAP e AIA e subcultivo dos explantes com adição de zeatina ro de brotos alongados (IPA-5 = 0,08 broto/explante e IPA-6 = 0,35 broto/explante).…”

“…Nessa espécie, a regeneração de plantas foi estabelecida há aproximadamente 20 anos (Kut et al, 1984;Sink & Reynolds, 1986), e métodos de regeneração têm sido relatados por diversos autores (Tan, 1987;McCormick, 1991;Redenbaugh et al, 1992;Wijbrandi & Both, 1993;Asakura et al, 1995;Fári et al, 1995a;Rhim et al, 1995). A partir de 1995, foram publicados diversos métodos sobre transformação genética via Agrobacterium tumefaciens e Agrobacterium rhizogenes (Shahin et al, 1986;Sukhapinda et al, 1987), bem como sobre transformação genética direta de protoplastos (Koornneef et al, 1986;Jongsma et al, 1987;Pieterse & Koornneef, 1988;Bellini et al, 1989).…”

Analysis of junction site between T-DNA and plant genome in Lissorhoptrus oryzophilus resistance GM rice

“…Bacillus thuringiensis 균주로부터 분리한 cryIII 유전자는 딱정벌레목 해충에 살충성을 가지고 있어 효율적으로 딱 정벌레목 해충을 방제 할 수 있다고 알려져 있으며 (Hoefte and Whiteley 1989;Krieg et al 1989), cryIII 유전자를 이용 한 형질전환으로 토마토 (Rhim et al 1995), 감귤 (Rhim et al 2004), 감자 (Jouzani et al 2008), 고구마 (Gonza´lez et al 2008), 옥수수 (Hibbard et al 2010) 등의 연구가 보고되었 고, 또한 cry3A 유전자를 도입한 감자와 알팔파의 기내 및 포장실험 실험에서 딱정벌레목에 대한 살충성이 확인 되었다 (Zhou et al 2012;Tohidfar et al 2013). 최근 국립농업과학원에서는 cry3A 유전자 형질전환 벼 를 육성하였으며, GMO 포장 내 생물검정 연구를 통해 벼 물바구미에 대한 내충성을 확인하였다 (Lee et al 2013 의 벼물바구미 내충성 벼를 실험재료로 사용하였고, 대 조체로는 형질전환 모본인 낙동벼(Oryza sativa cv.…”