RESUMO -Considerando a habilidade de bactérias e leveduras em produzir surfactantes atóxicos e biodegradáveis e a crescente preocupação da preservação ambiental, a produção de biossurfactantes por micro-organismos torna-se uma estratégia importante na obtenção de compostos compatíveis com o meio ambiente. Nesse sentido, o presente trabalho investigou a produção de biossurfactante por Candida tropicalis empregando resíduos industriais por meio de um planejamento experimental. Como resultado, foi observado que a condição contendo 2,5% de melaço, 2,5% de milhocina, 2,5% de óleo de canola residual, sob agitação de 250 rpm e com 2% de tamanho de inóculo foi a mais indicada para o bioprocesso estudado, tendo diminuído a tensão superficial do meio para 29,52 mN/m e alcançado rendimento em biossurfactante de 3,0g/L. O presente estudo demonstrou a efetividade do planejamento experimental na produção de biossurfactante, comprovando, em consequência, elevado potencial para aplicações ambientais.