<p>Se evaluó la colonización <em>in vitro </em>y la actividad enzimática extracelular (xilanolítica y celulolítica) de los hongos ruminales <em>Neocallimastix frontalis </em>H10001 y <em>Orpinomyces intercalaris </em>H20013 sobre hojas de las gramíneas <em>Brachiaria decumbens </em>y <em>Pennisetum clandestinum</em>. Para promover la colonización y actividad enzimática se utilizaron tres niveles de sulfato de sodio (0%, 4% y 12% p/v). La colonización se evaluó determinando el número de esporangios<strong>·</strong>mm–2 y la actividad enzimática se evaluó en el sobrenadante a las 72 h por cuantificación de los azúcares reductores liberados durante el proceso. El número de esporangios varió (P < 0,05) con la interacción tipo de gramínea <strong>× </strong>nivel de azufre. Para <em>N. frontalis </em>la adición de S incrementó el número de esporangios excepto para <em>N. frontalis </em>sobre <em>B. decumbens </em>(P < 0,05); mientras que para <em>O. intercalaris </em>la adición de S incrementó el número de esporangios en ambas gramíneas (P < 0,05). El mayor número de esporangios se obtuvo con <em>O. intercalaris </em>sobre <em>P. clandestinum </em>en las concentraciones de 4 y 12% de S (12,77 y 14,82 esporangios<strong>·</strong>mm–2, respectivamente). La actividad xilanolítica extracelular varío (P < 0,05) con el tipo de gramínea; la mayor actividad xilanolítica extracelular se determinó en el sobrenadante de <em>O. intercalaris </em>sobre <em>B. decumbens</em>. La actividad celulolítica extracelular varió (P < 0,05) con la interacción tipo de gramínea <strong>× </strong>nivel de azufre. La utilización de 4% de S incrementó (P < 0,05) la actividad celulolítica extracelular de los sobrenadantes de <em>N. frontalis </em>y <em>O. intercalaris </em>en ambas gramíneas; mientras que la adición de 12% de S no afectó (P > 0,05) la actividad celulolítica de <em>N. frontalis </em>sobre <em>P. clandestinum </em>y de <em>O. intercalaris </em>sobre <em>B. decumbens </em>en comparación con el control; no obstante, la actividad celulolítica extracelular en los sobrenadantes de <em>N. frontalis </em>sobre <em>B. decumbens </em>y de <em>O. intercalaris </em>sobre <em>P. clandestinum </em>se redujeron (P < 0,05). Los resultados de este estudio indican que el número de esporangios y la actividad celulolítica extracelular de cultivos puros de los hongos <em>N. frontalis </em>y <em>O. intercalaris </em>dependen del tipo de gramínea y del nivel de S presente en el medio de cultivo; así mismo, la presencia de S mejora el crecimiento y desarrollo de los hongos.</p><p> </p><p class="Pa6"><strong>Influence of sulphurum and type of substrate on the growth of ruminal fungi <em>Neocallimastix frontalis </em>and <em>Orpinomyces intercalaris</em></strong></p><p class="Default">The study was aimed at evaluating <em>in vitro </em>fungal colonization and specific enzyme acti-vity (xylanase and cellulase) of <em>Neocallimastix frontalis </em>H10001 and <em>Orpinomyces intercalaris </em>H20013 rumen fungi on <em>Brachiaria decumbens </em>and <em>Pennisetum clandestinum </em>leaves. Three sodium sulphate levels (0%, 4% and 12% w/v) were used for testing <em>in vitro </em>fungal colonization and enzyme activity. Colonization was evaluated by quantifying the number of sporangia on leaf fragments. Enzyme activity was determined by measuring the amount of reduced sugar on supernatant fraction. Type × grass and sulphur interaction levels (P < 0.05) affect sporangial number. The sporangial number for <em>N. frontalis </em>increased (P < 0.05) when S was added, except for <em>N. frontalis </em>on <em>B. decumbens</em>, whilst adding S increased (P < 0.05) <em>O. intercalaris </em>sporangial number in both grasses. The highest sporangial numbers were detected on <em>O. intercalaris </em>and <em>P. clandestinum </em>at 4% and 12% S (12.77 and 14.82 sporangia<strong>·</strong>mm–2, respectively). Extracellular xylanolytic activity was affected (P < 0.05) by grass type. The highest extracellular xylanolytic activity was detected in <em>O. intercalaris </em>supernatant on <em>B. decumbens</em>. Extracellular cellulolytic activity was affected (P < 0.05) by type × grass sulphur interaction levels. Adding 4% S increased (P < 0.05) extracellular cellulolytic activity in <em>N. frontalis </em>and <em>O. intercalaris </em>supernatants in both grasses; there were no effects on extracellular cellulolytic activity from <em>N. frontalis </em>supernatant on <em>P. clandestinum </em>and <em>O. intercalaris </em>supernatant on <em>B. decumbens </em>compared to control. Extracellular cellulolytic activity was reduced (P < 0.05) in <em>N. frontalis </em>on <em>B. decumbens </em>and <em>O. intercalaris </em>on <em>P. clandestinum</em>. Variation in sporangial number and of pure rumen fungi culture (<em>N. frontalis </em>and <em>O. intercalaris</em>) extracellular cellulolytic acti vity depended on grass type as well as culture medium S level. S could improve rumen fungi growth and development.</p>