Anastrepha fraterculus (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae) é uma espécie de mosca-das-frutas relevante do ponto de vista econômico e encontra-se amplamente distribuída no Brasil. O objetivo deste estudo foi avaliar a patogenicidade do isolado Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin (CPAFAP-3.8) contra imaturos e adultos de A. fraterculus em laboratório. Foram utilizados quatro tratamentos: isolado de M. anisopliae em solo estéril e em solo não estéril, e testemunha em solo estéril e em solo não estéril. Após a aplicação das suspensões de cada tratamento, larvas de 3° instar de A. fraterculus foram dispostas sobre o solo e mantidas em câmara do tipo B.O.D. à temperatura de 26 ± 2ºC, sem fotofase. Foi avaliada a emergência e a mortalidade dos adultos por 28 dias. Os resultados evidenciaram que a emergência dos adultos foi menor no tratamento com M. anisopliae em solo estéril (23%). Embora a emergência tenha sido alta no tratamento com M. anisopliae em solo não estéril (70%), a mortalidade dos adultos foi de 98,6%. A redução da sobrevivência dos adultos ocorreu mais rapidamente no tratamento com M. anisopliae em solo estéril, onde em 7 dias todos os adultos estavam mortos. No tratamento com M. anisopliae em solo não estéril, a sobrevivência caiu para 25,7% em 7 dias e para 14,2% em 10 dias. Nesse estudo ficou demonstrado que o isolado de M. anisopliae (CPAFAP-3.8) provoca mortalidade de imaturos e adultos de A. fraterculus sob condições controladas. Porém, ainda são necessários estudos de campo para avaliar o real potencial deste micro-organismo para o controle biológico da praga.