Eine Methode zur chemischen Bestimmung von östrogenen Hormonen in Blut, Milch und Colostrum

Abstract

In einer früheren Arbeit 1 wurde eine Nachweisreaktion zur Bestimmung von Östron, Östradiol und östriol beschrieben, die sich gegenüber bekannten Nachweisreaktionen durch ihre erhöhte Empfindlichkeit bei fluorometrischer Messung auszeichnet. Die untere Nachweisgrenze dieser Reaktion liegt bei etwa 10-^g Östron 1 ' 2 , so daß sie geeignet ist, die niedrigen Östrogenkonzentrationen im Blut auch bei geringen Ausgangsvolumina zu messen. In dieser Arbeit wird eine Methode zur getrennten Bestimmung von Östron, Östradiol-(17/5) und östriol in 2-4ml Blut oder Colostrum beschrieben. Für die Entwicklung der Arbeite Vorschrift wurden die an anderer Stelle 3 ' 1 beschriebenen Reinigungsschritte auf die genannten Körperflüssigkeiten zugeschnitten. Material und MethodikBlut und Colostrum wurden sofort nach der Entnahme aufgearbeitet. Die Lösungsmittel und Reagenzien entsprachen in ihrem Reinheitsgrad den bei östrogenbestimmungen im Harn 1 » 2 geforderten Bedingungen.Zur Beseitigung von Emulsionen wurde eine 5proz. (Gew./Vol.) wäßr. Lösung von "Bradosol" (Ciba AG, Wehr, Baden) verwendet.Fluoreszenzmessungen wurden am Photometer Eppendorf mit Fluoreszenzzusatz II durchgeführt.Extinktionsspektren wurden am Universalspektrophometer Zeiss (Jena) aufgenommen.Das verwendete Aluminiumoxyd (VEB Feinchemie, Eisennach) enthielt 4% Wasser. Die Standardisierung erfolgte nach 1. c. 3 .Arbeitsvorschrift zur östrogenbestimmung in Blut und Colostrum 1. Vorbereitung der Proben: Bei sehr fettreichen Substraten (Colostrum, Milch) wird das Fett durch Zentrifugieren (l Stde. bei etwa 10000 U./Min*); nach 30 Min. auf -5° abkühlen, feste Fettschicht abheben) weitgehend entfernt.Im Konzentrationsbereich über etwa 2 % östrogen/100 m? reichen 2 ml Untersuchungslösung bei fluorometrischer Messung aus (mittlere bis späte Gravi-1 G. Ittrich, Acta endocrinol., im Druck.

The Concentration of Oestrogens in Maternal and Foetal Blood Obtained at Caesarean Section, and the Effect of Hospitalization on Maternal Blood Oestrogen Levels

“…

THE pregnant woman excretes large amounts of oestrone and oestradiol and, in particular, very large amounts of oestriol in her urine (Brown, 1956); there are smaller amounts of oestrogens present in the peripheral blood of the pregnant woman (Preedy and Aitken, 1957; Aitken, Preedy, Eton and Short, 1958;Roy and Brown, 1960;Ittrich, 1960;Roy and Mackay, 1962). Earlier workers (e.g., Brown, 1957) considered that the placenta produced these large amounts of oestrogens, but other workers, in particular Diczfalusy and co-workers, suggested that oestrone and oestradiol were produced by the placenta and metabolized by the foetus to oestriol (Diczfalusy and Magnusson, 1958) or other metabolites (Diczfalusy et al, 1961).

…”

“…Aitken et al (1958) compared the levels in cord blood and in the maternal peripheral venous blood of two patients delivered by Caesarean section and two patients in normal labour. Other workers have published results for cord blood (Diczfalusy and Magnusson, 1958;Roy and Brown, 1960;Ittrich, 1960) but have not made a direct comparison between the levels in the mother and her foetus. The results of these previous investigations will be discussed later.The purpose of this paper is to report the results of a comparison of oestrogen levels in blood from the umbilical vein, the umbilical artery, the maternal uterine and arm vein, and also in amniotic fluid obtained from thirteen women at Caesarean section.…”

Application of the Ittrich Extraction Procedure to the Fluorimetric Measurement of Oestrogens in Blood

“…The lower limit of detection given by Ittrich (1960a) was approximately 0-001 µg. oestrone, and this was the figure obtained here on the basis of the limitations caused by the reagent 'blank values'.…”

“…Several combinations of organic solvent and phenol have been proposed for extracting the red Kober colour from the acid reaction mixture in which it is developed. Ittrich (1958) first used a solution of 2%^p-nitrophenol in chloro¬ form, but later changed to 2%^-nitrophenol in tetrabromoethane (Ittrich, 1960a). Salokangas & Bulbrook (1961) used 2%^-nitrophenol in tetrachloroethane and, after investigating other possibilities, their solvent system and extraction conditions were found to be the best in this laboratory, from the point of view of intensity and stability of fluorescence and ease of handling.…”

Oestriol in Amniotic Fluid: A Gas Chromatographic Method

“…More and more workers have developed techniques for estimating hormones in this fluid. The methods described for oestriol in amniotic fluid have included modifications of the method of Brown (1955) (Troen, JSTilsson, Wiqvist & Diczfalusy, 1961;Michie & Livingston, 1969), and modifications of the method of Ittrich (1960) (Wodrig & Goretzlehner, 1964). In all these instances a colorimetric endpoint is used.…”