-INTRODUÇÃOA salmonelose humana ocorre, principalmente, devido ao consumo de alimentos e água contaminados com Salmonella spp. Vários alimentos já foram associados a esta infecção. Entretanto, nos últimos anos observou-se em todo o mundo, um aumento de salmonelose humana devido ao sorotipo Enteritidis, relacionado com o consumo de frango, ovos e derivados [10,11]. O método convencional de detecção de Salmonella em alimentos envolve etapas de cultura dispendiosas e trabalhosas, consome longo tempo, necessitando-se normalmente de 4 a 5 dias para a confirmação dos resultados [4,6]. Portanto, o emprego de métodos rápidos, simples e confiáveis, é importante tanto no diagnóstico de toxinfecção, como também, e principalmente, no controle de qualidade de alimentos.Diversas técnicas imunológicas já foram desenvolvidas, usando tanto anticorpos monoclonais como policlonais os quais detectam a maioria dos sorotipos de Salmonella associados à infecção humana [12,18,21,25,33,40]. Estes ensaios estão disponíveis comercialmente na forma de kits [3], geralmente de custo inacessível para a maioria dos laboratórios brasileiros, principalmente para aqueles públicos e oficiais de diagnóstico de toxinfecção alimentar.O objetivo deste trabalho foi a produção de reagentes imunológicos para a detecção direta de Salmonella Enteritidis em alimentos, empregando-os na padronização de um ensaio imunoenzimático ELISA sanduíche.
-MATERIAL E MÉTODOS
-Produção e purificação do anti-soroO anti-soro policlonal para Salmonella Enteritidis foi obtido no Laboratório de Ciência de Alimentos, Departamento de Tecnologia de Alimentos e Medicamentos (TAM), Centro de Ciências Agrárias da Universidade Estadual de Londrina. O anti-soro foi produzido em coelho branco Nova Zelândia utilizando-se flagelina purificada gentilmente doada pelo Dr. Gary Wyatt do Institute of Food Research , Norwich, Inglaterra. Na primeira dose foram inoculadas 100µg de flagelina e após 9 dias foi injetada a mesma quantidade de antígeno. Após 70 dias, foi inoculada uma dose de reforço com 300µg de flagelina. As doses de flagelina foram administradas por injeção subcutânea, distribuídas em três diferentes locais na região dorsal do animal. O adjuvante de Freund completo foi empregado na primeira dose e o incompleto na segunda e terceira doses.
DETECÇÃO RÁPIDA DE Salmonella ENTERITIDIS EM ALIMENTOS POR ENSAIO IMUNOENZIMÁTICO ELISA 1Iliana ALCOCER 2 , Tereza Cristina R. M. de OLIVEIRA 2, * RESUMO O método convencional de detecção de Salmonella spp., além de trabalhoso, consome longo tempo, necessitando-se normalmente de 4 a 5 dias para a confirmação da presença dessa bactéria no alimento. Portanto, o emprego de métodos rápidos e simples é importante para o diagnóstico laboratorial de toxinfecção alimentar e para o controle de qualidade. O objetivo principal deste trabalho foi a padronização de ensaio imunoenzimático-ELISA para detecção de Salmonella Enteritidis em alimentos. O ensaio utilizou anticorpos policlonais para flagelina produzidos em coelho. O anti-soro apresentou pouca reaç...