Estandarización de la técnica de ELISA para el diagnóstico de Toxocariasis humana

Abstract

RESUMENOBJETIVO: Estandarizar la técnica ELISA para el diagnóstico de infección humana por Toxocara canis con antígeno excretado-secretado preparado en nuestro medio. MATERIAL Y MÉTODOS: Se colectó huevos de T. canis y se les incubó con formol (2%) a 28 o C hasta obtener larvas de tercer estadio, las que luego de ser liberadas fueron incubadas en RPMI a 37°C por 7 días; se reemplazó el medio por otro similar y almacenó a -20°C. Se concentró el antígeno y se dosó proteínas. Para la técnica de ELISA se utilizó sueros de pacientes con toxocariasis y de niños recién nacidos, como controles positivos y negativos, respectivamente, diluidos desde ¼ hasta 1/1024. Se sensibilizó placas de poliestireno con varias concentraciones de antígeno, utilizándose conjugado de peroxidasa e IgG de carnero anti IgG humana y sustrato OPD. Se realizó lectura de absorbancia a 492 nm con espectrofotómetro (Multiskan plus labsystems), siendo el punto de corte el promedio aritmético de la absorbancia de los sueros negativos más 3 desviaciones estándar. RESULTADOS: La concentración óptima del antígeno fue 50 ug/mL, la dilución del suero 1/128, la dilución del conjugado 1/1000 con densidad óptica mayor a 0,241. CONCLUSIONES: La técnica de ELISA para diagnóstico serológico de infección humana por Toxocara canis podría ser utilizada en estudios epidemiológicos en nuestro país. Queda pendiente la evaluación de su eficacia en futuros estudios. Palabras clave: Toxocara canis; toxocariasis; serología; ELISA. ELISA TECHNIQUE STANDARDISATION FOR HUMAN TOXOCARIASIS DIAGNOSIS SUMMARYOBJECTIVE: To standardise ELISA technique for Toxocara canis human infection diagnosis by using excreted-secreted antigen prepared in our country. MATERIAL AND METHODS: T. canis eggs were collected by incubation with formalin (2%) at 28 o C in order to obtain third stage larvae that were freed and incubated in RPMI at 37°C for 7 days; the medium was replaced by a similar one and stored at -20°C. Antigen was concentrated and protein dosage was made. Sera from patients with toxocariasis and newborns were used as positive and negative controls by ELISA technique, dilutions ¼ to 1/1024. Polystyrene plates were sensitised with antigen in several concentrations and conjugated peroxidase with horseradish IgG, anti human IgG and substrate OPD were used. Absorbance was read with spectrophotometer (Multiskan plus labsystems) at 492 nm. Cut off point was determined by negative sera absorbencies arithmetic mean plus 3 standard deviations. RESULTS: Antigen concentration was 50 ug/mL, sera dilution 1/128, conjugate dilution 1/1000 with optical density above 0,241. CONCLUSIONS: ELISA technique for serologic diagnosis of human infection by Toxocara canis could be used in epidemiological studies in our country. Its efficacy will be determined in future studies.

Frequency ofToxocara canisantibodies in Mexican paediatric patients with epilepsy

“…1, indicating seropositivity in 28/111 (25.2%) and seronegativity in 83/111 (74.8%) cases, in accordance with the cut-off point of optical density 0.80. The cut-off point was calculated as the average of negative sera ±2 standard deviations, whereas positive values greater were than 0.8 optical density(Espinoza et al ., 2003; Cardona et al ., 2005).

Fig.

…”

Toxocariosis humana: ¿problema de salud pública?

“…Elisa es la más ampliamente utilizada, que se aplica también en humor acuoso (38,46) . En ambos casos, la técnica tiene sensibilidad y especificidad por encima de 95%, lo que la convierte en una técnica sumamente útil para el diagnóstico (47)(48)(49)(50)(51)(52)(53)(54)(55)(56)(57) . Sin embargo, también puede utilizarse otras técnicas, como el western blot (58) y PCR (55) , que se constituyen en confirmatorias.…”

Parasitosis Intestinal, Factores De Riesgo Y Seroprevalencia De Toxocariosis en Pobladores Del Parque Industrial De Huaycán, Lima, Perú

“…Seroprevalencia de T. canis: para el serodiagnóstico de Toxocariosis Humana, se determinó la presencia de anticuerpos anti -Toxocara mediante la técnica de ELISA, estandarizada por Espinoza et al (2003). Se realizó el hemograma respectivo, y se obtuvo los valores de hemoglobina, hematocrito y la fórmula leucocitaria.…”

“…(1998) y Espinoza et al (2003); que encontraron entre 7% y 23,3% de positividad en la población de Lima, respectivamente.…”