RESUMO Objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito da suplementação com diferentes fontes proteicas na dieta de vacas leiteiras mantidas em pastagem de Brachiaria brizantha MG5 sobre os níveis séricos de glicose, triglicerídeos, colesterol e ureia e das enzimas gama glutamina transferase, creatina quinase e aminotransferase. Avaliaram-se diferentes fontes proteicas: coproduto de feijão, farelo de soja, farelo de girassol e farelo de algodão. Foram utilizadas 8 vacas cruzadas 5/8 (Holandês x Gir), peso médio 500±60,33kg, produção média de leite de 14,85±3,28kg/dia, entre 60 e 90 dias de lactação, em delineamento quadrado latino 4 x 4 duplo e simultâneo. Cada período experimental teve duração de 15 dias, sendo 10 dias iniciais para adaptação dos animais e os demais para avaliação e coleta de dados. Houve efeito de interação (P<0,05) das fontes proteicas e tempos de coleta sobre os níveis séricos de glicose. Não houve efeito (P>0,05) das fontes proteicas para os valores de triglicerídeos, colesterol e ureia dos animais, com média de 6,46±2,05; 182,43±37,52 e 38,20±12,29mg/dL, respectivamente. Houve efeito (P<0,05) dos tempos de coleta nos níveis sanguíneos de triglicerídeos e ureia. As diferentes fontes proteicas também não influenciaram (P>0,05) os níveis séricos das enzimas gama glutamina transferase, creatina quinase e aminotransferase, com médias de 26,76±8,02; 112,13±31,72 e 58,79±20,13 UI/L, respectivamente. As fontes proteicas promoveram alterações na glicemia com os tempos de coletas, sendo que estes alteraram os valores de triglicerídeos e ureia. Não foram observadas alterações para os demais metabólitos sanguíneos.