Evaluación de Cuatro Tiempos de Cultivo sobre la Tasa de Maduración y División Post-Fecundación in vitro de Ovocitos de Alpaca

Abstract

RESUMENSe evaluó el efecto del tiempo de cultivo sobre la tasa de maduración nuclear y tasa de división posfecundación a 72 horas de ovocitos de alpacas. Complejos CumulusOvocitos (CCOs) fueron obtenidos de ovarios procedentes de animales beneficiados en el camal y transportados a 35 °C en solución salina 0.9% suplementada con antibiótico antimicótico. Los CCOs fueron aspirados de folículos de 2 a 6 mm. Experimento 1: 502 ovocitos fueron distribuidos en cuatro tiempos de maduración (30, 34, 38 y 42 horas) y madurados en TCM-199 suplementado con 10% suero fetal bovino (SFB), 0.5 µg/mL de FSH, 10 µg/mL de hCG, 0.2 mM de piruvato de sodio, 50 µg/mL de gentamicina y 1 µg/mL de E2, y cultivados a 39 ºC bajo una atmósfera de 5% de CO 2 y alta humedad. Posteriormente, los ovocitos fueron removidos, lavados con PBS suplementado con 10% de SFB y 1 mg/ml de hialuronidasa y fijados en solución de etanol y ácido acético (3:1). Los ovocitos fueron colocados en portaobjetos, teñidos con 1% de orceína y examinados bajo un microscopio a 400x para determinar la maduración nuclear. Experimento 2: 533 ovocitos fueron cultivados bajo las mismas condiciones del experimento 1 y fecundados con espermatozoides obtenidos de epidídimos. Los espermatozoides fueron centrifugados a 700 g en una gradiente de Percoll discontinua (22.5:45%) por 25 minutos. El sobrenadante fue removido y el pellet (con espermatozoides viables) reconstituido con TL-Stock. Los gametos fueron co-cultivados por 18 horas a 39 ºC con 5% de CO 2 en KSOM suplementado con 10% de SFB, 2 mM de piruvato de sodio y 50 µg/mL gentamicina, y evaluados

Effect of FSH and eCG on Alpaca (Vicugna pacos) Oocyte Maturation in vitro

“…Likewise, the percentages of GVBD were similar to previous studies in llamas (Sansinena et al 2003), but they differ from other reports in alpacas (Ratto et al 2005;Ratto et al 2007;Ruiz et al 2017) and dromedary camels (Farag et al 2013). The percentages of DG were similar to previous reports for alpacas (Ratto et al 2007;Ruiz et al 2017) and dromedary camels (Farag et al 2013), but they are higher than other reports in alpacas (Huanca et al 2014) and llamas (Ratto et al 2005). The percentages of GV found in this study are in agreement with the results reported for alpacas (Huanca et al 2014;Ruiz et al 2017) and dromedary camels (Farag et al 2013).…”

“…Previous studies using higher concentrations of FSH (0.5μg.mL -1 ) allowed similar maturation rates, such as 5μg.mL -1 of FSH in llamas (Sansinena et al 2003); 10 µg.mL -1 of b-FSH and b-LH in dromedary camels (Nowshari, 2005). However, other studies have shown higher rates of maturation of oocytes when using 0.5µg.mL -1 of FSH in alpacas (Ratto et al 2007;Huanca et al 2014;Ruiz et al 2017) and llamas (Ratto et al 2005). However, the same concentration of FSH, 0.5μg.mL -1 , has resulted in lower rates of maturation in llamas (Del Campo et al 1994).…”

“…Oocyte staining was performed according to the previous description by Huanca et al (2014) with some modifications. The oocytes in groups of 5 to 10 were immersed in PBS, placed onto a slide, covered with a coverslip, and vaseline was placed at the corners of the coverslip to avoid contact.…”

“…Previous studies in alpacas used 0.5µg.mL -1 of FSH as a supplement in maturation medium at a fixed concentration during in vitro maturation of oocytes (Ratto et al 2007;Huanca et al 2014;Ruiz et al 2017), in this process, the use of eCG in alpacas is not typical. However, in other species, different concentrations of gonadotropins in maturation medium have been studied (Choi et al 2001;Farag et al 2012;Wei et al 2017;Wei et al 2018).…”

Semen Handling in South American Camelids: State of the Art

“…As an alternative to AI, embryo transfer has been attempted in SACs (10). Successful within-species embryo transfer was achieved in both llamas (11)(12)(13)(14) and alpacas (15,16). Crossspecies embryo transfer between SACs was also accomplished with in vivo generated embryos (12,17,18).…”