Evaluación de una prueba de ELISA con antígeno metabólico de Fasciola hepatica para el diagnóstico de fasciolosis humana en Cajamarca, Perú.

Abstract

Se obtuvo el antígeno metabólico (antígeno excreción -secreción) de Fasciola hepatica de ovinos infectados de Cajamarca, con una concentración proteica de 1 005 µg/µL, compuesta principalmente por proteínas de peso molecular entre 1,2 y 170 KDa. Se detectaron bandas de 170; 150; 31; 24; 18-14 y 10 kDa. Con este antígeno se desarrolló una prueba de ELISA y se determinó su punto de corte en 0,140. Se evaluó 33 sueros de pacientes con fasciolosis confirmada por visualización de huevos en heces, 177 sueros de pacientes sin fasciolosis provenientes de áreas endémicas de Cajamarca y 88 sueros de pacientes con otras infecciones parasitarias y bacterianas. Se encontró una sensibilidad de 97,0%, especificidad de 96,6%, valor predictivo positivo de 78,1% y valor predictivo negativo de 99,6%. Se encontró reacción cruzada en 9/88 sueros evaluados. Se recomienda la implementación y uso de esta prueba para el diagnóstico de fasciolosis.

Estandarización de la tecnica de Western blot para el diagnóstico de la fasciolosis humana utilizando antigenos de excreción-secreción de Fasciola hepatica

“…En este trabajo se ha encontrado que la banda 23 KDa está presente en todos los sueros que dieron reacción serológica positiva, en otros trabajos reportan una banda de 24 KDa, que podría ser la misma, diferenciándose por la determinación de los pesos moleculares. Esta banda es producto de excreción-secreción, propia del tegumento del parásito que parece formar parte de las células tegumentales y gránulos tipo 1 y tipo 2 (T1 y T2) presentes en los estadios inmaduros y adultos del trematodo (30,31) , lo que indica que esta proteína es una de las más importantes en la respuesta inmune (15) .…”

“…La diferencia de especificidad reportada en otros trabajos (15,21,23) se debería a la calidad del antígeno utilizado, especialmente a la forma de su obtención.…”

“…En la fase prepatente la F. hepatica aún no produce huevos, por lo tanto, la serología puede ser positiva aunque los exámenes coproparasitoscópicos sean negativos, a pesar de encontrarse el parásito en los conductos biliares (13) . En la fase crónica, el parásito se encuentra en los conductos biliares, causando hiperplasia de las paredes, con marcada fibrosis hepática (13) y un extensivo daño causado por la secreción de enzimas parasitarias que destruyen el parénquima hepático (14) ; en esta etapa la serología y los exámenes de heces son positivos (15) . En esta parasitosis el parásito elimina huevos a través de las heces del huésped, siendo un proceso intermitente, pudiendo la F. hepatica sobrevivir más de una década y causar daño de manera asintomática o con síntomas inespecíficos, sin tener el parasitado la necesidad de ser evaluado clínicamente; por ello, el inmunodiagnóstico es el método de elección para el diagnóstico de la fasciolosis en la fase aguda, prepatente y crónica (15,16,17) .…”

“…En la fase crónica, el parásito se encuentra en los conductos biliares, causando hiperplasia de las paredes, con marcada fibrosis hepática (13) y un extensivo daño causado por la secreción de enzimas parasitarias que destruyen el parénquima hepático (14) ; en esta etapa la serología y los exámenes de heces son positivos (15) . En esta parasitosis el parásito elimina huevos a través de las heces del huésped, siendo un proceso intermitente, pudiendo la F. hepatica sobrevivir más de una década y causar daño de manera asintomática o con síntomas inespecíficos, sin tener el parasitado la necesidad de ser evaluado clínicamente; por ello, el inmunodiagnóstico es el método de elección para el diagnóstico de la fasciolosis en la fase aguda, prepatente y crónica (15,16,17) . La utilización de las técnicas inmunológicas para apoyar el diagnóstico clínico de la fasciolosis se justifica por la baja sensibilidad de los exámenes coproparasitoscópicos (18) .…”

Hiperendemicidad de fasciolosis y factores de riesgo en niños de edad escolar del distrito de Orurillo, Puno

“…El diagnóstico serológico se realizó mediante una prueba de ELISA IgG y la técnica de inmunoblot IgG (IB). La técnica de ELISA-IgG fue utilizada como prueba de tamizaje empleando kits in house de ELISA-IgG (Cornejo et al, 2010;Sánchez et al, 2010), utilizando el antígeno metabólico «crudo» de F. hepatica excretado/secretado (AMESFH) con una concentración proteica de 1 mg/ml. La lectura se hizo con el lector de ELISA Biotek ELX800, aceptando a las muestras con absorbancias por encima del valor de corte como reactivas y a las muestras con absorbancias iguales o menores al valor de corte como no reactivas.…”