Evaluation of therapeutic sensitivity of retinal ganglion cells to targeted peptide bioregulator in culture

Abstract

Цель-изучить терапевтическую чувствительность культуры клеток сетчатки к пептидному биорегулятору, выделенному из сетчатки крупного рогатого скота (Ретиналамин), при моделировании глаукомной оптиконейропатии. Материал и методы. Клетки выделяли из изолированных сетчаток новорожденных мышей. Клеточные пласты дезагрегировали и переводили в форму суспензии. Для удаления нецелевых популяций добавляли антитела для деплеции клеток с маркером CD48 и вносили связывающиеся с ними магнитные антибиотиновые микросферы. Для селекции ганглиозных клеток и получения их обогащенной фракции проводили иммуномагнитную сепарацию. Для проверки токсичности препарата на культуре фибробластов кожи провели цитотоксический тест с разведениями Ретиналамина в концентрациях 5,0-0,009 мг/мл. Клетки рассевали в концентрации 5000 на лунку и экспонировали с препаратом 24 ч. Для изучения эксайтотоксического повреждения в 1-ю группу лунок с клетками сетчатки вносили раствор глутамата натрия до концентрации 20 мМ, во 2-ю группу-Ретиналамин в концентрации 1,25 мг/мл, в 3-ю-оба вещества. Интактные лунки были контрольными. Экспозиция с тестируемыми субстанциями длилась 24 ч. Далее оценивали жизнеспособность клеток колориметрическим методом. Оптическую плотность измеряли автоматическим фотометром с длиной волны детекции 490 нм. Результаты. Полученная в результате иммуномагнитной сепарации культура является смешанной и представлена ганглиозными и глиальными клетками. Ретиналамин не обладает значимой токсичностью ни в одной из исследованных концентраций. Эксайтотоксическое повреждение вызвало значимое снижение количества жизнеспособных клеток в культуре (9% от контроля). При совместном внесении глутамата и Ретиналамина в его конечной концентрации 1,25 мг/мл количество выживших клеток возросло до 51,6%. Межгрупповые различия статистически значимы при использовании критерия Стьюдента. Заключение. Ретиналамин не обладает цитотоксичностью. При совместном внесении глутамата и Ретиналамина токсическое действие первого на выделенные клетки сетчатки достоверно снижается.

Estimation of the Efficiency of the Model of Nmda-Induced Glaucomatous Optic Neuropathy in Rats.

“…Глаукома, будучи широко распространённым нейродегенеративным заболеванием, является одной из частых причин слепоты, в том числе и необратимой [1; 2]. Течение данного заболевания характеризуется прогрессирующей селективной гибелью ганглиозных клеток сетчатки глаза [3], повреждением волокон зрительного нерва [2] и необратимыми дефектами поля зрения [1]. Одного только снижения внутриглазного давления для стабилизации глаукомного процесса обычно оказывается недостаточно, и важным моментом является принятие мер, направленных на остановку процессов нейродегенерации сетчатки и зрительного нерва путем применения различных нейропротекторных методов [4].…”