Gel hand sanitizer merupakan sediaan hand sanitizer yang praktis untuk digunakan. Penggunaan hand sanitizer secara berulang dengan antiseptik kimia dapat menyebabkan iritasi dan kulit kering, sehingga antiseptik alami dapat digunakan sebagai alternatif untuk mengatasi masalah tersebut. Akar kuning mengandung alkaloid berberin, flavonoid, saponin, dan terpenoid yang memiliki sifat antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan gel hand sanitizer akar kuning dengan variasi gelling agent. Evaluasi formula meliputi organoleptik, homogenitas, pH, viskositas, daya sebar, daya lekat, uji hedonik, dan uji stabilitas freeze-thaw. Efektivitas sediaan gel diukur menggunakan metode replika. Hasil skrining fitokimia menunjukkan ekstrak etanol akar kuning mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, dan terpenoid. Berdasarkan analisis ANOVA (sig < 0,05), terdapat perbedaan yang signifikan pada karakteristik gel hand sanitizer. Uji stabilitas menunjukkan bahwa formula satu dan formula tiga merupakan formula yang stabil berdasarkan analisis uji T Paired Sample. Formula optimum gel hand sanitizer ekstrak etanol 80% akar kuning adalah formula satu yang memiliki efektifitas 40,33% untuk menurunkan jumlah bakteri.