Identificação de fatores de transcrição e sinais celulares que regulam a expressão do gene cspC em Caulobacter crescentus.

Abstract

Resumo SANTOS, J. S. Identificação de fatores de transcrição e sinais celulares que regulam a expressão do gene cspC em Caulobacter crescentus 2011. 89 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia) -Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2011.As proteínas de choque frio pertencem a uma família de proteínas com um domínio altamente conservado, denominado domínio de choque frio (CSD). Estão envolvidas em vários processos celulares, incluindo adaptação a baixas temperaturas, estresse nutricional e fase estacionária. Em C. crescentus, uma α-proteobacteria não patogênica, as proteínas CspC e CspD apresentam dois CSDs e seus níveis aumentam apenas durante a fase estacionária. Este trabalho tem como objetivo determinar os fatores de transcrição e sinais celulares envolvidos na regulação do gene cspC em C. crescentus. No presente trabalho, foi realizada a varredura de uma biblioteca de 4000 clones mutados pela inserção do transposon Tn5, onde foram identificados sete mutantes com expressão reduzida de cspC: CCNA03569 (proteína hipotética); CCNA02510 (deacetilase de oligossacarídeos); CCNA01594 (metiltransferase da proteína ribossomal L11); CCNA02186 (pequena subunidade da acetato lactato sintase); CCNA00084 (fosforibosil aminoimidazol carboxamida formiltransferase/ IMP ciclohidrase); CCNA03616 (sulfito redutase dependente de NADPH) e CCNA01448 (frutose-1,6-bisfosfatase). Através de ensaios de expressão na presença de um meio condicionado, verificou-se que cspC e cspD aparentemente não são induzidos em resposta ao aumento de densidade populacional. O fenótipo do mutante cspC na fase estacionária foi avaliado em relação a sua resistência a estresse oxidativo, e vimos que a linhagem ∆cspC é altamente sensível ao peróxido de hidrogênio e a superóxidos, mas não é sensível a hidroperóxido orgânico. A ausência de cspC provavelmente é compensada por dps, já que a expressão deste gene aumenta no mutante ∆cspC. Por outro lado, a transcrição de katG diminui, mas as atividades de KatG e SodB não são afetadas no mutante cspC. Em condições de estresses provocados por peróxido de hidrogênio, sacarose e sal a expressão de cspC não é afetada. Os fatores sigmas SigT e SigU e o regulador de transcrição Fur não estão envolvidos na regulação de cspC, mas no mutante ∆sigJ a expressão de cspC aumenta, e no mutante ∆oxyR ela é diminuída. Foi verificado também que cspC apresenta uma autoregulação positiva, que pode se dar por meio de estabilização de seu próprio mRNA. Palavras-chaves: Caulobacter crescentus. cspC. Fase estacionária. Choque frio. Estresse oxidativo. ABSTRACT SANTOS, J. S. Identification of transcription factors and cellular signals that regulate cspC gene expression from Caulobacter crescentus. 89 f. 2011. Masters thesis (Microbiology) -Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2011.The cold shock proteins belong to a family of proteins presenting a highly conserved domain, called cold shock domain (CSD). They are involved in various cellular processes, including adaptat...

Caracterização dos mecanismos de ação da proteína CspC na manutenção da viabilidade e na resposta de <i>Caulobacter crescentus</i> a estresses.

“…Entretanto, nesta mesma região de cspC está presente uma sequência muito similar à sequência de ligação predita da família de proteínas RegA do grupo 2 (Figura 2). No meu trabalho de mestrado, através de ensaios de atividade de β-galactosidase, foi observado que cspC é autoregulado e provavelmente esta regulação de cspC ocorre via estabilização do seu próprio mRNA(SANTOS, 2011). Entretanto, sua indução na fase estacionária continua ocorrendo no mutante cspC, e é dependente da região promotora.…”