Improvements in the isolation of igy from the yolks of eggs laid by immunized hens

Polson, A.; Coetzer, Theresa H.T.; Krüger, J.; Maltzahn, E. von; Merwe, K. J. van der

doi:10.3109/08820138509022667

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“…Se ha utilizado la precipitación de las proteínas con etanol preenfriado para separarlas del PEG en solución (12); no obstante, el carácter potencialmente denaturante del etanol puede afectar la actividad de las IgY, lo cual efectivamente se comprobó en los ensayos de actividad por ELISA.…”

Section: Discussionunclassified

“…Se ensayaron los métodos de Polson et al (12) y Jensenius y Koch (22), que utilizan dilución con buffer y precipitación con PEG 8000 al 3,5% o 4,4%, respectivamente; el método de Jensenius et al (16) precipitando con sulfato de dextrano y CaCl 2 ; el método de Akita y Nakai (23) diluyendo con agua sin acidificar y dos precipitaciones al 19% y 14% con Na 2 SO 4 , y el método de Akita y Nakai (24) diluyendo con agua acidificada a pH 5,0 y precipitación con (NH 4 ) 2 SO 4 al 60% s. Para determinar la heterogeneidad de los extractos se realizó electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE-SDS) comparando alícuotas tomadas después de la delipidación de las yemas y de la muestra final después de cada precipitación. La actividad de las fracciones después del paso de deslipidación y del paso de precipitación se determinó por ensayos de ELISA.…”

Section: Remoción De Lípidos Y Extracción De Igyunclassified

“…La producción de IgY, obtenidas según Polson et al (12) y evaluada por ELISA, se muestra en la figura 1. Con la dosis más baja de LSB (50 µg) se observó un período de máxima producción entre los 26 y los 40 a 45 días, mientras que para 200 y 500 µg de antígeno por …”

Section: Ensayos De Inmunizaciónunclassified

“…Se observa que la delipidación con PEG 8000 al 3,5% o 4,4% (12,22) permite recuperar cantidades importantes y similares de proteína con pocos contaminantes como se aprecia en el perfil por PAGE-SDS, particularmente en el caso de la precipitación con PEG al 3,5% (figura 2, carril 5 ).…”

Section: Ensayos De Deslipidación Y Extracciónunclassified

“…Ello resulta en mayores concentraciones de IgY en la yema que en el suero; diferentes determinaciones arrojan valores hasta de 15 a 25 mg de inmunoglobulinas por ml de yema en gallinas hiperinmunizadas (11) y, dependiendo del método de aislamiento, se pueden recuperar entre 3 y 5 mg de anticuerpo/ml de yema (12), por lo que el método empleado en su purificación es crítico para lograr buenos rendimientos.…”

unclassified

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Obtención y purificación de IgY dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis.

et al. 2005

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Introducción. Las inmunoglobulinas presentes en la yema de huevo de gallina (IgY) han sido ampliamente utilizadas en inmunología, bioquímica, biotecnología y salud humana y animal. Aunque presentan una serie de ventajas frente a las IgG de mamíferos, su aislamiento requiere, por una parte, la eliminación de los lípidos presentes en la yema del huevo sin alterar su funcionalidad y, por otra, la utilización de metodologías de purificación que permitan una recuperación tal que haga factible su empleo como herramientas de detección y purificación a una escala significativa. Objetivo. Dado el interés que presenta el antígeno Tn como marcador tumoral en muchos tipos de cáncer, y la capacidad que tiene la lectina aislada de semillas de Salvia bogotensis para reconocer específicamente este antígeno, se adelantó el presente trabajo con la meta de disponer de IgY anti-lectina para emplearla en estudios inmunohistoquímicos y de biología celular. Materiales y métodos. Se produjo IgY anti-lectina inmunizando gallinas con lectina de S. bogotensis y se evaluó la respuesta inmune en función de la dosis y del tiempo; se ensayaron varios métodos de remoción de lípidos y de extracción y se compararon los rendimientos y la pureza de IgY obtenidas con varios métodos de purificación. Resultados. El mejor método de delipidación y extracción de IgY requiere dilución con agua, acidificación del extracto y precipitación con (NH 4 ) 2 SO 4 60%s, recuperándose 43,35 mg de proteína/yema. La cromatografía tiofílica permite obtener las IgY puras en buena cantidad (10,4 mg/yema), preservando la funcionalidad y características de estos anticuerpos. Conclusión. Se establecieron las mejores condiciones para extraer y purificar IgY funcionales dirigidas contra la lectina de S. bogotensis. Palabras clave:Lamiaceae, inmunoglobulinas Y, Salvia, lectina, purificación, antígeno Tn. Purification of IgY against Salvia bogotensis lectinIntroduction. Egg yolk immunoglobulins (IgY) have been extensively used in immunology, biochemistry, and biotechnology in studies of human and animal health. However, their use requires two preparatory steps: first, the egg yolk lipids must be removed without impairing the immunoglobin functional properties, and second, the isolation methods must allow high recoveries for further use as detection and purification tools. Objective. Because Tn antigen presence serves as a tumoral marker and because S. bogotensis lectin's can specifically recognize this antigen, the current study aims at making available an anti-lectin IgY. This tool will be useful in histochemical and cellular studies involving transformed cells. Materials and methods. Anti-lectin IgY was produced by immunization of hens with S. bogotensis lectin, and the effect of antigen dose on IgY levels was assesed. Several methods for lipid removal, IgY extraction and purification were assayed, and yields and purity of IgYs were established for each method. Results. The best delipidation and extraction method included yolk dilution with water under acidic conditions and...

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Section: Discussionunclassified

Section: Remoción De Lípidos Y Extracción De Igyunclassified

Section: Ensayos De Inmunizaciónunclassified

Section: Ensayos De Deslipidación Y Extracciónunclassified

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Obtención y purificación de IgY dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis.

et al. 2005

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Using electrophoresis to observe the interaction of nitrogenase with ions

2000

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The two protein components of nitrogenase from Klebsiella pneumoniae were shown to interact with metal ions and ADP, altering their electrophoretic mobility in polyacrylamide gel electrophoresis. Both Mg+2 and Mn+2 caused reduced mobility of Fe protein relative to other proteins. The effect was about 50% complete at concentrations around 0.2 mM. Other ions including Fe+2, Ni+2 and Co+2 had no observable effect at levels up to 1 _mM. Both Cd+2 and Zn+2 appeared to interact with the protein; Cd+2 at 0.5 mM dramatically destabilized the protein. The effects of more than a dozen different mutations of the Fe protein on Mg+2 interaction were examined. All mutated proteins appeared to interact with Mg+2 similarly to wild-type. Using relative mobility differences of charge-changed mutants it was estimated that two to three Mg+2 interact with each Fe protein monomer. The MoFe protein also showed interaction with metal ions but the alteration of mobility was much smaller than for the Fe protein because it is larger and less acidic, so that it runs much more slowly than the Fe protein in standard gels. The interaction of ADP with Fe protein was examined in the presence of Mg+2. Increasing ADP partially reversed the mobility decrease observed on Mg+2 binding, and produced a more diffuse protein band indicative of a reaction zone of interconverting conformers. No alteration of MoFe protein mobility was observed with ADP added during electrophoresis.

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Improved Methods for the Separation and Purification of Immunoglobulin from Egg Yolk by Chromatography Filtration and One Step Anion‐Exchange

Chen

Zhang

et al. 2004

Food for Health in the Pacific Rim

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Improvements in the isolation of igy from the yolks of eggs laid by immunized hens

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Obtención y purificación de IgY dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis.

Obtención y purificación de IgY dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis.

Using electrophoresis to observe the interaction of nitrogenase with ions

Improved Methods for the Separation and Purification of Immunoglobulin from Egg Yolk by Chromatography Filtration and One Step Anion‐Exchange

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