Obtención y purificación de IgY dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis.

Abstract

Introducción. Las inmunoglobulinas presentes en la yema de huevo de gallina (IgY) han sido ampliamente utilizadas en inmunología, bioquímica, biotecnología y salud humana y animal. Aunque presentan una serie de ventajas frente a las IgG de mamíferos, su aislamiento requiere, por una parte, la eliminación de los lípidos presentes en la yema del huevo sin alterar su funcionalidad y, por otra, la utilización de metodologías de purificación que permitan una recuperación tal que haga factible su empleo como herramientas de detección y purificación a una escala significativa. Objetivo. Dado el interés que presenta el antígeno Tn como marcador tumoral en muchos tipos de cáncer, y la capacidad que tiene la lectina aislada de semillas de Salvia bogotensis para reconocer específicamente este antígeno, se adelantó el presente trabajo con la meta de disponer de IgY anti-lectina para emplearla en estudios inmunohistoquímicos y de biología celular. Materiales y métodos. Se produjo IgY anti-lectina inmunizando gallinas con lectina de S. bogotensis y se evaluó la respuesta inmune en función de la dosis y del tiempo; se ensayaron varios métodos de remoción de lípidos y de extracción y se compararon los rendimientos y la pureza de IgY obtenidas con varios métodos de purificación. Resultados. El mejor método de delipidación y extracción de IgY requiere dilución con agua, acidificación del extracto y precipitación con (NH 4 ) 2 SO 4 60%s, recuperándose 43,35 mg de proteína/yema. La cromatografía tiofílica permite obtener las IgY puras en buena cantidad (10,4 mg/yema), preservando la funcionalidad y características de estos anticuerpos. Conclusión. Se establecieron las mejores condiciones para extraer y purificar IgY funcionales dirigidas contra la lectina de S. bogotensis. Palabras clave:Lamiaceae, inmunoglobulinas Y, Salvia, lectina, purificación, antígeno Tn. Purification of IgY against Salvia bogotensis lectinIntroduction. Egg yolk immunoglobulins (IgY) have been extensively used in immunology, biochemistry, and biotechnology in studies of human and animal health. However, their use requires two preparatory steps: first, the egg yolk lipids must be removed without impairing the immunoglobin functional properties, and second, the isolation methods must allow high recoveries for further use as detection and purification tools. Objective. Because Tn antigen presence serves as a tumoral marker and because S. bogotensis lectin's can specifically recognize this antigen, the current study aims at making available an anti-lectin IgY. This tool will be useful in histochemical and cellular studies involving transformed cells. Materials and methods. Anti-lectin IgY was produced by immunization of hens with S. bogotensis lectin, and the effect of antigen dose on IgY levels was assesed. Several methods for lipid removal, IgY extraction and purification were assayed, and yields and purity of IgYs were established for each method. Results. The best delipidation and extraction method included yolk dilution with water under acidic conditions and...

Biochemical parameters in the blood of Holstein calves given immunoglobulin Y-supplemented colostrums

“…Antibodies are employed in various roles in biomedical studies; they are usually obtained from mammals [ 12 ]. However, in recent years, chicken IgY has been increasingly used [ 13 ] as it can be easily extracted from egg yolks. In addition to aspects related to animal welfare, the levels of Abs produced by chickens are greater than those obtained from various animals, in particular rabbits [ 14 ].…”

Efecto del anticuerpo IgY y núcleo proteico Nu - Pro en el desempeño y características de la canal de corderos en crecimiento

“…Además, la IgY preserva la flora normal inalterada logrando suministrar al mismo tiempo productos de bacterias beneficiosas, y no promueve el desarrollo de resistencia bacteriana (Bilba et al, 2007). De igual manera, la IgY presente en la yema de huevo se ha utilizado para diversas aplicaciones de inmunología, biotecnología, bioquímica, salud animal y humana (Barroso et al, 2005). De allí, los anticuerpos IgY se han utilizado de forma satisfactoria en inmunohistoquímica para la detección de antígenos virales y bacterianos, tanto de origen vegetal o animal, así como para el estudio de la incidencia de parásitos intestinales en animales domésticos (Chacana et al, 2004).…”