Introducción: Staphylococcus aureus (SA) al ser una bacteria invasiva posee una alta prevalencia a causar infecciones nosocomiales, ya que, comúnmente se encuentra en fosas nasales y manos del personal de salud como de los pacientes. Debido a su naturaleza ubicua, este patógeno se encuentra mayoritariamente en ambientes hospitalarios y es considerado un vector de enfermedades infecciosas, se estima que más del 70% de bacterias que causan infecciones nosocomiales generan resistencia al menos a un fármaco de uso común. Objetivo general: Determinar la susceptibilidad antimicrobiana de cepas de S. aureus presentes en superficies inertes del Hospital José Félix Valdivieso. Metodología: Se realizó un estudio cuantitativo de tipo descriptivo de corte transversal, las muestras fueron constituidas por las superficies inertes de las áreas de emergencia y hospitalización tales como: barandales de camillas, interruptores, manijas de puertas, porta sueros y fichas metálicas, para la recolección de las muestras se utilizó hisopos estériles humedecidos en caldo BHI, que fueron conservados y transportados para su procesamiento en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Bioquímica y Farmacia de la Universidad Católica de Cuenca. Resultados: Se aislaron 6 cepas de S. aureus distribuidas en las áreas de cirugía (67%) y pediatría (33%), de las cuales el 100 % presentó sensibilidad a cefoxitina y 3 fueron resistentes a penicilina, clindamicina y eritromicina, estos dos últimos mediante resistencia inducible. Conclusión: Se evidenció la presencia de S. aureus en dos áreas críticas llegando a ser un factor de riesgo para el desarrollo de infecciones nosocomiales.