Objetivo: analisar as práticas assistenciais no uso do cateter venoso central para a prevenção das Infecções Primárias da Corrente Sanguínea em uma Unidade de Terapia Intensiva. Método: estudo transversal realizado em um Hospital Universitário entre março e junho de 2018 com profissionais de uma Unidade de Terapia Intensiva. Utilizaram-se questionário estruturado e observação não participante dos procedimentos inserção, preparo e administração de medicação e troca de curativos de cateter central. Os dados foram analisados por meio da estatística descritiva com aplicação do Teste Qui-quadrado e exato de Fisher. Resultados: participaram 83 profissionais de enfermagem e 25 médicos. Foram observadas 260 administrações de medicações, 32 inserções de cateter e 29 trocas de curativos. Houve inadequação da prática de higienização das mãos nos procedimentos de manutenção, principalmente entre os técnicos de enfermagem. Os melhores resultados foram preparo da pele (94%), secagem espontânea do antisséptico antes das punções (96,87%) e respeito às trocas dos equipos de infusão contínua e intermitente (93,42%). Conclusão: o seguimento dasmedidas preventivas estava comprometido em oportunidades importantes para evitar Infecções Primárias da Corrente Sanguínea, sendo necessário reforçar a educação permanente e a implementação de protocolos assistenciais.