Involvement of Perforin/Granzyme B-Dependent Signaling Pathway in Cytotoxic Activity of Dendritic Cells Towards Human Glioblastoma Cells

Abstract

Адрес для переписки:Тыринова Тамара Викторовна ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии» 630099, Россия, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14. Тел.: 8 (383) 228-21-01. Факс: 8 (383) 222-70-28. E-mail: ct_lab@mail.ru, tyrinova@bk.ru Address for correspondence: Tyrinova Tamara V. Research Institute of Fundamental and Clinical Immunology 630099, Russian Federation, Novosibirsk, Yadrintsevskaya str., Медицинская иммунология, 2017. Т. 19, № 4. С. 421-430. doi: 10.15789/1563-0625-2017-4-421-430 © Тыринова Т.В. и соавт., 2017 For citation: T.V. Tyrinova, O.Yu. Leplina, S.V. Mishinov, M.A. Tikhonova, A.V. Kalinovskiy, S.V. Chernov, V.V. Stupak, A.A. Ostanin, E.R Meditsinskaya Immunologiya, 2017, Vol. 19, no. 4, pp. 421-430. doi: 10.15789/1563-0625-2017 Резюме. Грануло-опосредованная цитотоксичность для клеток-эффекторов является универ-сальным механизмом подавления опухолевого роста и индукции гибели клеток-мишеней. Целью работы явилось изучение экспрессии цитолитических молекул дендритными клетками (ДК), гене-рированными в присутствии IFNα (IFN-ДК), а также исследование роли грануло-опосредованного механизма в реализации цитотоксической активности IFN-ДК против опухолевых клеточных линий. IFN-ДК генерировали путем культивирования прилипающей фракции МНК в присутствии GM-CSF и IFNα в течение 4 суток с последующим дозреванием с ЛПС в течение 24 ч. Опухолевые линии были получены из фрагментов опухоли пациентов с внутримозговой глиобластомой. Индукция созревания IFN-ДК под действием ЛПС ассоциировалась с накоплением внутриклеточного пула молекул пер-форина и гранзима Б. Экспрессия перфорина в ЛПС-стимулированных IFN-ДК прямо коррелирова-ла с внутриклеточной экспрессией лизосомально-ассоциированного мембранного белка-1 (LAMP-1/ CD107a), при этом уровень последнего не менялся в ответ на стимуляцию ЛПС. В то же время ЛПС стимулировал дегрануляцию в IFN-ДК, о чем свидетельствовало увеличение доли клеток, экспрес-сирующих CD107a на поверхностной мембране ДК. Активация ЛПС генерированных из моноци-тов крови тех же доноров ДК по стандартному протоколу (в присутствии GM-CSF и IL-4 [IL-4-ДК]) не влияла на уровень экспрессии перфорина и гранзима Б в IL-4-ДК, которая была значимо ниже по сравнению с аналогичными культурами IFN-ДК. В ответ на стимуляцию ЛПС отмечалось уве-личение внутриклеточного пула CD107a в IL-4-ДК при отсутствии изменений в поверхностной экс-прессии CD107a. Исследование цитотоксической активности ЛПС-стимулированных IFN-ДК про-тив глиобластомных клеточных линий показало вовлеченность перфорин/гранзим Б-сигнального пути в реализацию цитотоксической активности ДК, поскольку блокирование этого механизма с по-мощью ингибитора вакуолярной Н + -АТФ-азы конканамицина А (СМА) ослабляло цитотоксическую . Chernykh "Involvement of perforin/granzyme B-dependent signaling pathway in cytotoxic activity of dendritic cells towards human glioblastoma cells", Medical Immunology (Russia)/