Limbah rumput pahitan ini berpotensi menjadi pakan ternak jika dilakukan pengolahan dengan cara menurunkan kandungan ligninnya. Lignin merupakan zat antinutrisi pada pakan ternak yang keberadaannya dapat menurunkan ketercernaan nutrisi pakan. KPK Mycelioptora thermophilia KLUM1 menghasilkan enzim ligninase yaitu Lignin Peroksidase, Mangan Peroksidase dan Lakase yang dapat mendegradasi lignin pada rumput pahitan. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui pengaruh waktu fermentasi dan jumlah spora terhadap kadar lignin, lemak kasar, dan protein kasar rumput pahitan oleh KPK Mycelioptora thermophilia KLUM1. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen laboratoris menggunakan metode Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktor waktu fermentasi (14 dan 21 hari) dan faktor jumlah spora (1,72x10 7 , 4,29x10 7 , dan 8,59x10 7 sel). Secara umum, tahapan penelitian yang dilakukan adalah preparasi, fermentasi limbah rumput menggunakan KPK Mycelioptora thermophilia KLUM1, dan pengujian hasil fermentasi berupa kandungan lignin, lemak kasar, protein kasar. Hasil penelitian menunjukkan kondisi terbaik untuk kadar lignin dan lemak kasar pada penelitian ini yaitu pada variasi jumlah spora 8,59 x 10 7 sel selama 21 hari dengan kadar lignin sebesar 9,98% ± 0,23 dan kadar lemak kasar 3,43% ± 0,04, sementara kondisi terbaik untuk kadar protein kasar yaitu pada variasi jumlah spora 1,72 x 10 7 sel selama 14 hari sebesar 11,64% ± 0,18. Kata kunci: kapang pelapuk kayu; Mycelioptora thermophilia; lignin; limbah rumput; pakan ternak.