Isolation, Purification and Evaluation of Serological Activity of Rabies Virus Antigens

Abstract

несмотря на значительный прогресс в области вирусологии, иммунологии и молекулярной биоло-гии, а также колоссальные усилия многих поколений ученых и практиков по борьбе с бешенством, этот зооноз продолжает оставаться чрезвычайно сложной проблемой для многих стран мира, в том числе и для Пробл. особо опасных инф. 2017; 4:27-31 цель работы. оценка серологической активности антигенов вируса бешенства, выделенных из мозговой тка-ни мышей и очищенных ультрацентрифугированием с предварительной дезинтеграцией на FastPrep. материалы и методы. в работе использовали производственный штамм вируса бешенства «овечий» гнки. вирус бешен-ства выделяли из мозговой ткани экспериментально зараженных мышей с последующим изучением электрофоре-тического профиля. серологическую активность компонентов вируса оценивали иммуноблотом и иФа с исполь-зованием специфических антирабических сывороток крови. результаты и выводы. в ходе сравнения методов выделения и очистки антигена вируса бешенства наиболее оптимальным определено проведение гомогенизации на FastPrep-24 с последующим фракционированием в градиенте сахарозы. в результате фракционирования в сту-пенчатом градиенте плотности сахарозы с концентрацией 15-50 % при 25000 g в течение 120 мин получено пять фракций вируса бешенства. максимально очищенной являлась белковая фракция, отобранная с зоны сахарозы 15-20 %, соответствующая молекулярной массе 67 кда. специфическая антигенная активность фракции в иФа достигала титра 1:1280 (коэффициент специфичности 2,2). в результате иммуноблота антигенов, полученных с градиента сахарозы в диапазоне 40-45 и 20-35 % после ультрацентрифугирования, выявлена одна мажорная фракция полипептидов (54 кда), проявившая наиболее высокую антигенную активность. полученные результаты будут применимы при конструировании тест-систем для проведения скрининговых исследований на бешенство и мониторинга эффективности противоэпизоотических мероприятий. Objective of the study is to evaluate the serological activity of rabies virus antigens isolated from the brain tissue of mice by homogenization on FastPrep followed by ultracentrifugation. Materials and methods. Producer strain of the rabies virus "Ovechiy" GNKI. The rabies virus was isolated from the brain tissue of experimentally infected mice, followed by the study of the electrophoretic profile. The serological activity of the virus components was assessed by immunoblot and ELISA using specific anti-rabies sera. Results and conclusions. In the course of comparing the methods of isolation and purification of the rabies virus antigen, it was found that most optimal one is to use a homogenization on FastPrep-24, followed by fractionation in a sucrose gradient. As a result of fractionation in a graded sucrose density gradient with a concentration of 15-50 % at 25000 g for 120 min, five fractions of the rabies virus components were obtained. The maximum purified protein fraction was from 15-20 % sucrose zone, which corresponded to a molecular weight of 67 kDa. The specific antigen activity of the fraction in ELISA reached...

Untitled

“…The γ-globulin fraction was isolated by precipitation with a 2.78 M solution of ammonium sulfate according to the previously described procedure, [12] followed by dialysis against a starting 0.025 M Tris-HCl buffer (pH=7.8). The primary fraction emerged as a free peak; the yield of the subsequent fractions was initiated by changing the linear molar gradient by introducing 0.150 M Tris-HCl buffer into the system, which allowed separating the globulins from the carrier.…”