Sequoia sempervirens (D. Don) Endl. é uma conífera que produz madeira de elevada qualidade, com potencial de aplicação na indústria. No entanto, a espécie exibe baixas taxas de germinação. Este estudo foi dedicado à otimizar um protocolo para a multiplicação de brotos de S. sempervirens, através da micropropagação. Dois genótipos, adaptados ao Sul do Brasil, foram a fonte de explantes para o estudo da multiplicação in vitro. Utilizou-se o meio de cultura MS (Murashige Skoog) (50% de sua concentração original) complementado com reguladores de crescimento sob duas abordagens. Para a multiplicação, foram combinados ácido α-naftaleno acético (ANA) e 6-benzilaminopurina (BAP), em concentrações distintas. No segundo experimento foram testadas, separadamente, três concentrações de cintinas (BAP, cinetina e 2-isopentenladenina). ANA , na concentração 0,1 mg L-1, permitiu a produção de brotos com maior comprimento médio do ramo principal. O uso de cinetina, em baixas concentrações, proporcionou o melhor desempenho para a multiplicação de brotos, mas com desempenhos distintos, de acordo com o genótipo. Descrevemos uma recomendação dos reguladores de crescimento de plantas mais adequados e suas concentrações para a multiplicação de brotos de S. sempervirens, o que pode auxiliar trabalhos voltados para enraizamento e aclimatização adventícia.