Для молекулярной диагностики инфекций картофеля Y-вирусом и вирусом скручива-ния листьев картофеля (ВСЛК) разработаны иммунохроматографические тест-системы. Чтобы размножить антиген -капсидный белок труднодоступного флоэмно-ограничен-ного ВСЛК, был создан бинарный вектор, содержащий кДНК рекомбинантной РНК то-бамовируса, в которой ген капсидного белка был заменен на ген белка оболочки ВСЛК. Рекомбинантная тобамовирусная РНК упаковывалась белком оболочки ВСЛК в сфери-ческие вирусные частицы. Химерный вирус был инфекционен, а выход его и белка обо-лочки ВСЛК при выделении был в 800 раз выше, чем у дикого типа. К химерному вирусу были получены антитела для лабораторного и полевого анализа инфекции картофеля. На основании опыта разработки и применения диагностических тест-систем предлага-ется тактика рациональной массовой лабораторной и практической диагностики вирус-ных заболеваний организмов на молекулярном уровне.
Ключевые слова: Y-вирус картофеля, вирус скручивания листьев картофеля, химерный вирус, иммунохроматография, инфекция, молекулярная диагностика.Молекулярная диагностика инфекций является частным случаем поиска целевой нуклеотидной по-следовательности и/или целевого антигена. В об-щем случае молекулярная диагностика не зависит от биологической природы патогена и организма хозяина, меняется только метод подготовки об-разца к анализу [1].Современная массовая диагностика основана на двух принципах молекулярного взаимодействия: на молекулярной гибридизации комплементарных гетероциклических оснований нуклеиновых кислот и на узнавании антигена антителом. В недалеком будущем геномное секвенирование и генетические паспорта организмов станут обычными. В этом слу-чае молекулярная диагностика сможет не только устанавливать окончательный диагноз, но и, воз-можно, позволит узнать, как возникло заболевание.В лабораторной диагностике фитопатогенов наиболее часто используются иммуноферментные и иммунохимические анализы (ИФА, ИХА), им-мунохроматографические тест-системы (ИХТС), иммуночипы; ДНК(РНК)-зонды, ПЦР и ОТ-ПЦР (обратная транскрипция-полимеразная цепная ре-акция), ДНК(олигонуклеотиды)-чипы. Для дости-жения предельной чувствительности диагностического анализа, например, в технологии ОТ-ПЦР-МГА (молекулярный-гибридизационный анализ)-ИФА, системы усиления сигнала комбинируют [2].Доминирующими в практической лабораторной диагностике вирусов растений являются технологии иммуноферментного анализа, молекулярного гиб-ридизационного анализа и различные варианты полимеразной цепной реакции ввиду их высокой чувствительности, специфичности и производи-тельности. Для одновременного выявления не-скольких патогенов в одном образце предлагаются различные технические решения, из которых наи-более перспективным представляется развитие чиповой технологии.В МГУ на кафедре вирусологии биологиче-ского факультета и в НИИ ФХБ имени А.Н. Бело-зерского совместно с ВНИИКХ имени А.Г. Лорха разработано несколько высокоэффективных мето-дов молекулярной диагностики вирусных и вироид-ной инфекций картофеля для анализа Центральной коллекции оздор...