Molecular diagnosis of the myeloproliferative neoplasms: UK guidelines for the detection of JAK2 V617F and other relevant mutations

Abstract

SummaryMolecular genetic assays for the detection of the JAK2 V617F (c.1849G>T) and other pathogenetic mutations within JAK2 exon 12 and MPL exon 10 are part of the routine diagnostic workup for patients presenting with erythrocytosis, thrombocytosis or otherwise suspected to have a myeloproliferative neoplasm. A wide choice of techniques are available for the detection of these mutations, leading to potential difficulties for clinical laboratories in deciding upon the most appropriate assay, which can lead to problems with inter-laboratory standardization. Here, we discuss the most important issues for a clinical diagnostic laboratory in choosing a technique, particularly for detection of the JAK2 V617F mutation at diagnosis. The JAK2 V617F detection assay should be both specific and sensitive enough to detect a mutant allele burden as low as 1-3%. Indeed, the use of sensitive assays increases the detection rate of the JAK2 V617F mutation within myeloproliferative neoplasms. Given their diagnostic relevance, it is also beneficial and relatively straightforward to screen JAK2 V617F negative patients for JAK2 exon 12 mutations (in the case of erythrocytosis) or MPL exon 10 mutations (thrombocytosis or myelofibrosis) using appropriate assays. Molecular results should be considered in the context of clinical findings and other haematological or laboratory results.

Developing method for allelic somatic mutations burden of Janus kinase 2 (V617F JAK2) detection in pools of venous blood samples

“…При разработке метода учитывались рекоменда-ции по детекции мутации V617F JAK2 [5]. С целью выявления мутации V617F JAK2 использовали со-бранный в нашей лаборатории набор реактивов для метода аллель-специфической ПЦР в режиме ре-ального времени (ПЦР-РВ).…”

“…В качестве та-ких образцов могут выступать охарактеризованные в референс-лабораториях клинические образцы или клеточные культуры с известным уровнем аллель-ной нагрузки [1,3,5]. При этом важным требовани-ем к среде для разведения образцов является при-сутствие в ее составе соответствующего количества ДНК с «диким» аллелем для учета чувствительности теста к показателю соотношения аллелей в услови-ях существенного избытка молекул ДНК без иско-мой мутации.…”

“…Bench и C. Martinaud [5,12] метод, основанный на опреде-лении параметров накопления флюоресцентного сигнала в пробах с заведомым отсутствием искомой мутации в связи с образованием неспецифического продукта амплификации на поздних стадиях ПЦР. Полученные таким образом значения расчетной аллельной нагрузки позволяют определить вероят-ность получения ложнопозитивного результата при заданном пределе аналитической чувствительности метода.…”

“…Одно-временно было продемонстрировано, что распро-страненность мутации V617F JAK2 среди большой выборки добровольцев, не имеющих онкогематоло- , М.А. МИХАЛЁВ 1,4,5 , И.А. ОЛЬХОВСКИЙ* 1, 3 1 Красноярский филиал ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Красноярск, Россия; 2 ФГАОУ ВПО «Сибирский федеральный университет»; 3 ФГБУН «Красноярский научный центр Сибирского отделения РАН», Красноярск, Россия; 4 ГБОУ ВПО «Красноярский ГМУ им.…”

“…В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздрава России, Красноярск, Россия; 5 МБУЗ «Городская клиническая больница №7», Красноярск, Россия Тест на выявление мутаций в гене JAK2 включен в клинические рекомендации ВОЗ в качестве одного из основных диа-гностических критериев хронических миелоидных опухолей. Вместе с тем, распространенность мутации V617F JAK2 среди добровольцев, не имеющих онкогематологического заболевания, составляет от 0,15 до 1,2%.…”