Otimização De Protocolo Para Extração De Dna De Tecido Foliar De Duas Espécies De Ingazeiro

Abstract

RESUMO A determinação de um protocolo de extração de DNA genômico de boa qualidade e quantidade é condição chave para a realização de estudos moleculares em plantas. Como o DNA isolado deve estar livre de contaminantes, ajustes de protocolo são necessários, especialmente para espécies em que estudos desse tipo são poucos. Assim, o presente estudo teve por objetivo otimizar um protocolo de extração de DNA para as espécies Inga edulis e I. laurina, visando futuros estudos de diversidade genética utilizando marcadores moleculares. Os testes de extração partiram do protocolo padrão de CTAB. Foram testadas duas concentrações do detergente CTAB (2 e 5%) e três concentrações de β-mercaptoetanol (0, 1 e 2%), além da adição de Proteinase K (20 mg.mL-1) no tampão de extração, cujo procedimento foi aplicado em folhas maduras maceradas em nitrogênio líquido. Os resultados demonstraram que o tampão com a concentração de 5% de CTAB foi mais eficiente no isolamento de amostras de DNA das duas espécies de ingazeiro. Quanto ao β-mercaptoetanol, nenhuma das três concentrações utilizadas no tampão de extração interferiram na quantidade e qualidade do DNA obtido. Assim, o método com CTAB 5% no tampão de extração pode ser utilizado para isolamento de DNA visando estudos de caracterização genética com marcadores moleculares. PALAVRAS-CHAVE: Inga edulis; Inga laurina; isolamento de DNA

Research Article Improved methods for storing and extracting DNA from <i>Ilex</i> <i>paraguariensis</i> (Aquifoliaceae) tissue samples

“…However, when the samples were stored in CTAB at room temperature for 90 days (Figure 2E), both the leaf tissues and the liquid part of the sample had brown coloration, characteristic of polyphenol oxidation. During homogenization of foliar tissues to initiate DNA extraction and isolation, even in freshly collected samples, phenolic compounds are irreversibly oxidized, binding to the protein and nucleic acids (Soares et al, 2016) and making DNA unsuitable for molecular studies. Phenolic compounds are the main substrate for polyphenol oxidase enzymes that are activated during oxidation.…”

Diversity and genetic structure of natural populations of the palm tree Euterpe precatoria (Arecaceae)

“…The total genomic DNA was extracted from approximately 100 mg of leaves, using the CTAB method described by Doyle and Doyle (1990), with modifications suggested by Soares et al (2016) and Zortéa et al (2016). The DNA concentration were estimated by comparison with the lambda DNA and the samples were diluted to a concentration of 15 ng.μL -1 to perform the amplifications.…”