Introducción: Los biocidas son compuestos químicos que se emplean comúnmente para inhibir o eliminar el crecimiento microbiano. El triclosán es un agente biocida que afecta la estructura y función microbiana. Es ampliamente utilizando como desinfectante y antiséptico en suturas quirúrgicas, exfoliantes, implantes y dispositivos médicos, pero se ha observado el desarrollo de múltiples mecanismos de tolerancia bacteriana a este agente. Objetivo: Determinar la tolerancia al triclosán en cepas de Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae. Materiales y métodos: Se llevó a cabo un estudio descriptivo de corte transversal, de tipo observacional, a partir de cepas de origen clínico que presentaran algunos genotipos de resistencia a los antibióticos como blaTEM, blaCTXM1 y blaSHV. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (C1, C2, C3, C4 y C5) al triclosán. Resultados: De los 32 aislamientos recuperados, 17 fueron de E. coli y 15 de K. pneumoniae. Se evidenció que el 25% de los aislamientos evaluados presentó tolerancia a concentraciones más bajas C1 (0,00025%) de triclosán y que el 12% fue tolerante a la concentración más alta C1 (1%). Adicionalmente, un mayor número de cepas de E. coli presentó mayor tolerancia al triclosán que las cepas de K. pneumoniae. Así mismo, se evidenció que la mayoría de las cepas fueron tolerantes a las concentraciones evaluadas más bajas.