ABSTRACT. Heparin (HEP) is known due to their side effects and the red seaweed Halymenia floresia (Hf) sulfated polysaccharides (SP) are heparinoids. In this study we purified the Hf-SP obtained from an aqueous extract and evaluated their anticoagulant activities. Hf-SP 1 (25°C), Hf-SP 2 (80°C) and Hf-SP 3 (80°C) were sequentially isolated. Hf-SP 3 had the highest sulfate content (37.45%). Hf-SP 3 was fractionated by ion exchange chromatography on a DEAEcellulose column using a NaCl gradient. Fractions were lyophilized and submitted to 0.5% agarose gel electrophoresis. The anticoagulant activity was evaluated by the activated partial thromboplastin time using rabbits plasma and expressed in international units per mg of SP using standard HEP ). The chromatographic procedure separated into four different SP fractions (F I, F II, F III and F IV) eluted at concentrations of 0.50, 0.75, 1.00 and 1.25 M of NaCl, respectively, reveling among them different marked on charge density, when compared by electrophoresis. F III had the highest anticoagulant activity (10.72 IU mg -1 ), suggesting that the sulfate is important in this process. In conclusion, our results suggest that sequential extractions of Hf-SP are an important biotechnological tool for identification of novel anticoagulants and studies of structural characterization are already in progress.Keywords: marine alga, sulfated macromolecules, purification, physical-chemical characterization, blood coagulation.RESUMO. Atividade anticoagulante de frações polissacarídicas sulfatadas de um extrato aquoso obtido da alga marinha vermelha Halymenia floresia (Clemente) C. Agardh. A heparina (HEP) é conhecida devido aos seus efeitos colaterais e os polissacarídeos sulfatados (PS) da alga marinha vermelha Halymenia floresia (Hf) são heparinoides. Objetivou-se purificar os Hf-PS obtidos de um extrato aquoso e avaliar suas atividades anticoagulantes. Foram isolados seqüencialmente Hf-SP 1 (25°C); Hf-SP 2 (80°C) e Hf-SP 3 (80°C). Os Hf-SP 3 apresentaram o maior conteúdo de sulfato (37,45%), sendo fracionados por cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-celulose utilizando um gradiente de NaCl. As frações obtidas foram liofilizadas e submetidas à eletroforese em gel de agarose a 0,5%. A atividade anticoagulante foi avaliada por meio do tempo de tromboplastina parcial ativada usando plasma de coelho e HEP padrão ). O procedimento cromatográfico separou em quatro diferentes frações de PS (F I, F II, F III e F IV), eluídas nas concentrações 0,50; 0,75; 1,00 e 1,25 M de NaCl, respectivamente, revelando diferenças marcantes na densidade de carga entre elas, quando comparadas por eletroforese. A maior atividade anticoagulante foi obtida na F III (10,72 UI mg -1 ), sugerindo que o sulfato é importante nesse processo. Os resultados sugerem que extrações seqüenciais de Hf-SP são uma ferramenta biotecnológica importante para a identificação de novos anticoagulantes. Estudos relacionados à caracterização estrutural já estão em andamento.Palavras-chave: alga marinha, macromolécu...