Agaricus subrufescens é um cogumelo que produz lacases, oxirredutases que degradam corantes. As condições de cultivo como concentração de nitrogênio, fonte de carbono e indutores podem aumentar a produção de lacase. O objetivo deste estudo foi cultivar A. subrufescens com ureia, subprodutos agroindustriais e indutores para produzir lacase para descoloração de corantes. Agaricus subrufescens U7-1 e U7-3 foram cultivadas em meio líquido com ureia (0, 2, 4, 6 e 8 g L-1), fontes de carbono (glicose, melaço de cana-de-açúcar – MC e de soja - MS) e indutores (álcool veratrílico, etanol, guaiacol e vanilina). O extrato enzimático do cultivo foi usado na descoloração de remazol azul brilhante R (RBBR), preto reativo 5 (PR5) e verde malaquita (VM). A produção de lacase de A. subrufescens foi maior com menores concentrações de ureia e a maior atividade de lacase de U7-1 ocorreu com 2 g L-1 de ureia e U7-3 sem ureia. MC aumentou a atividade e antecipou o pico de lacase de U7-1 em cinco dias e de U7-3 em 15 dias. MS reduziu a atividade de lacase. Vanilina aumentou a atividade de lacase de U7-1 em 29% (44380 U L-1) e antecipou o pico de atividade; e vanilina e álcool veratrílico aumentaram a atividade de lacase (44770 U L-1) de U7-3, mas atrasaram o pico de atividade. Os extratos de U7-1 e U7-3 do cultivo com vanilina descoloriram o RBBR em 24 horas (65% e 75%) e VM (70%, 24 e 72 horas), mas não reduziram a cor de PR5.