Purification et quelques caractéristiques moléculaires du " composant-3 " des protéose-peptones

Abstract

Purification et quelques caractéristiques moléculaires du ({composant-3 » des protéose-peptones par D. PAQUET et C. ALAIS* avec la collaboration technique de F. AUBERT Résumé Les protéose-peptones étaient isolées de lait cru ou de lactosérum acide par trois méthodes, puis examinées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Elles présentaient des profils densitométriques presque identiques. Seule, la bande correspondant au composant-S était colorée par le réactif de Schiff. La chromatographie liquide d'interactions hydrophobes sur colonne de phenylsepharose CL 4B était une bonne méthode pour fractionner les protéose-peptones en leurs composants principaux. Une chromatographie supplémentaire sur gel de séphacryl S 200 permettait de purifier le composant-3. L'analyse des acides aminés montrait que ce composant contenait moins de proline mais plus de sérine et de glycine que les protéose-peptones d'origine. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodecyl sulfate de sodium donnait un poids moléculaire voisin de 22 000. La sérine était identifiée comme acide aminé N-terminal par dansylation. Le taux de phosphore était voisin de 1,1 %.

Revue bibliographique : la fraction protéose-peptones du lait

“…Ces bandes étant numérotées de 1 à 38 à partir de l'origine, le composant 3 correspond aux bandes 4 et 5, le composant 5 aux bandes 15 et 16 et le composant 8F à la bande 38 (Andrews et Alichanidis, 1983). Des lots de protéose-peptones différant par leur mode de pré-paration ont été comparés par électropho-rèse en tubes de gel de polyacrylamide à pH 8,6, et l'absence relative de composant 8S dans la fraction sigma-protéose a été observée (Pâquet et Alais, 1982). L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de sodium dodécyle sulfate (SDS) et de 2-mercaptoéthanol (Pâquet, 1986) montre une distribution très large des masses moléculaires entre 80 000 et 5 000 D (Fig.…”

“…L'utilisation de gradients de pH étroits de 2,5 à 6,5 a permis de dénombrer au moins 30 bandes entre pH 4 et 5,5 dont 5 principales (Pâquet et Alais, 1982). Cette technique ne permet pas encore de déterminer avec précision la répartition des points isoélectriques des nombreux composants.…”

“…La chromatographie d'interactions hydrophobes sur colonne de phényl-Sépharose en tampon phosphate de sodium 0,1 M, pH 6,8, sépare les constituants principaux selon leur taux d'hydrophobicité de surface dans un gradient linéaire et décroissant de sulfate d'ammonium. Le composant 3 est de loin le plus hydrophobe, suivi du composant 5; le composant 8F ainsi que d'autres peptides ne s'adsorbent pas sur la matrice hydrophobe même en présence de sulfate d'ammonium 1M (Pâquet et Alais, 1982;Pâquet et al, 1985).…”

“…Le caractère hydrophobe marqué de cette fraction permet son isolement par chromatographie d'interactions hydrophobes suivie d'une filtration sur gel à partir de la fraction "sigma-protéose" (Pâquet et Alais, 1982). L'extraction quantitative par ce type de chromatographie montre que la fraction hydrophobe repré-sente environ 25% des protéose-peptones totales éluées (Pâquet et al, 1985).…”

Isolement et caractérisation de la fraction hydrophobe des protéose-peptones des laits bovin, ovin et caprin

“…Initialement, nous avons appliqué la méthode de Pâ-quet et Alais (1982), nous déposons 300 mg de Iyophilisat de PPT en solution dans 10 ml de tampon (phosphate de sodium 0,01 rncl.r'", pH 6,8 et sulfate d'ammonium 0,35 moU-') au sommet de la colonne de Phényl-Sépharose CL-4B (Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Suède). Afin d'augmenter les rendements de purification des fractions protéose-peptones, nous avons optimisé ce protocole.…”