Rapid on-Site Detection of the Huanglongbing/Citrus Greening Causal Agent 'Candidatus Liberibacter Asiaticus' by Amplifyrp®, a Novel Rapid Isothermal Nucleic Acid Amplification Platform

Abstract

Huanglongbing (HLB) has become the most serious threat to the citrus industry worldwide. Although the disease first emerged in the southeastern part of Asia, it is now well established in Brazil, Florida and California, which are the world's most important citrus production areas. The disease is associated with three insect-vectored, obligate intracellular bacteria of the genus 'Candidatus Liberibacter'. These bacteria reside in the host phloem cells and they are transmitted by psyllids. Early pathogen detection is important to protect free areas from pathogen introduction. Unfortunately, the disease has a long incubation period, during which the pathogen is at low concentration and non-systemically distributed. This makes diagnostic and eradication difficult. Agdia has recently developed a new, rapid, molecular detection technique, AmplifyRP ® , allowing PCR-level sensitivity detection within minutes, in the field. AmplifyRP ® uses a recombinase-polymerase methodology for DNA amplification at a single temperature. In contrast to conventional or real-time PCR, AmplifyRP ® has no DNA purification requirements, requires no thermocycling, and results can be read using small, user-friendly devices. A portable fluorescence reader or a lateral flow device (similar to Agdia's ImmunoStrip ®) can be used to visualize results in as little as 30 minutes, compared to several hours for conventional PCR. AmplifyRP ® eliminates the need for expensive PCR equipment, a large number of chemicals reagents, and the need for technically trained staff. Given its characteristics, AmplifyRP ® is the ideal tool to monitor HLB progression by early detection of Ca. Liberibacter in citrus trees or in vector insects.

Comparison of the starch-iodine reaction technique with the Recombinase Polymerase Amplification for citrus Huanglongbing (HLB) diagnosis

“…En los cortes transversales de las hojas infectadas con HLB (Figura 1b) se observó la tinción y coloración púrpura oscura de gránulos de almidón acumulados en las células parenquimatosas del rango constante de temperatura (de 20°C a 45°C), evitando así el uso de equipos sofisticados como el termociclador (Zaghloul & El-shahat, 2014). Agdia Inc. ha desarrollado una plataforma de detección basada en esta tecnología y tiene disponible un kit de detección del HLB, denominado AmplifyRP® (Russell, McOwen, Bohannon, Amato & Bohannon, 2015). Este permite una rápida y fácil detección a nivel de campo.…”

Identificación de tecnologías y métodos para la detección temprana del Huanglongbing (HLB) a través de cienciometría en artículos científicos y patentes

“…El HLB es una enfermedad que tiene un largo periodo de incubación, durante el cual el patógeno está en baja concentración y no está sistemáticamente distribuido (Gottwald, 2010), por lo que se diculta el diagnóstico y la erradicación (Bayer, 2015). Russell et al (2015), como investigadores de la empresa Agdia, han desarrollado una nueva y rápida técnica molecular, AmplifyRP , que permite la detección al nivel de la PCR en cuestión de minutos y en campo. AmplifyRP utiliza una metodología con base en la polimerasa recombinasa para la amplificación del ADN a una sola temperatura.…”

“…Agropecuaria, 21 (2): e1208 DOI: https://doi.org/10.21930/rcta.vol21_num2_art:1208 tiene requerimientos de puricación de ADN, ni termociclado. Los resultados se pueden leer usando dispositivos pequeños y fáciles de usar, además de eliminar la necesidad de utilizar equipos costosos de PCR y de personal técnicamente capacitado, y reducir el número de reactivos químicos (Russell et al, 2015). Dada sus características, AmplifyRP se potencia como una herramienta ideal para monitorear la progresión de HLB mediante la detección temprana de C. Liberibacter spp.…”

“…Dada sus características, AmplifyRP se potencia como una herramienta ideal para monitorear la progresión de HLB mediante la detección temprana de C. Liberibacter spp. en árboles de cítricos o en insectos vectores (Russell et al, 2015).…”