Recovery of proteins from corn and soybean extracts by membrane adsorption

Abstract

in Wiley InterScience (www.interscience.wiley.com).Efficient separation strategies for the recovery of high-value proteins (native or recombinant) from plant agriculture are an important aspect of many different processes, from biopharmaceuticals to byproduct recovery during biofuel production. Here we report the use of membrane adsorption for the recovery of proteins from soybean and corn extracts, and compare the results with packed bed adsorption. Two alternative operating modes were investigated, a flowthrough strategy and a bind and elute method. Overall, membrane adsorption provided faster throughput, and had equal or slightly higher dynamic binding capacities compared with resin beads, without compromising yield and purity of the chosen target. Soybean was found to be an ideal plant host when capturing native protein on an anion exchange medium. This provided an opportunity to capture a large percentage ([80%) of native protein as the product, and/or allowed for elevated enrichment factors ([20) during purification of a recombinant target with pI [ 7.0, using a flowthrough approach. On the other hand, for corn, a single ion-exchange step was not able to capture more than 60% of the native protein. However, the bind and elute method with corn as the host for a recombinant product allowed for higher enrichment factors compared to soybean. In all cases, the concentration of a recombinant protein (as dictated by expression level) was found to play a significant role in the level of dynamic binding capacity, with higher concentration leading to elevated capacity. Likewise, a higher concentration of competing proteins was shown to decrease the overall capacity of a recombinant target.

Recent update on methodologies for extraction and analysis of soybean seed proteins

“…Based on their findings, the alkaline peptides showed stronger antioxidant capacity than the acidic and neutral peptides. In another study, Menkhaus and Roseland separated soybean and corn proteins using a membrane adsorption technique and compared it with packed bed adsorption. The authors concluded that the yield and purity of the native protein were higher using this technique as compared with the packed bed method, because membrane adsorption encompasses multiple factors such as the buffer, the experimental conditions and the protein properties.…”

Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja

“…Plantas são utilizadas a milhares de anos em tratamentos de doenças e terapias, e atualmente, com o avanço das técnicas de biologia molecular, plantas vêm sendo utilizadas como biorreatores para produção de moléculas de interesse, que não eram encontradas ou produzidas naturalmente. Em 1983, apareceram os primeiros relatos sobre o uso da tecnologia do DNA recombinante para a produção de plantas transgênicas, que inicialmente era utilizada, principalmente, para se obter plantas com características agronômicas favoráveis, tais como resistência a insetos, déficit hídrico, aumento de produtividade, entre outros (MENKHAUS et al, 2004). Os primeiros relatos de plantas transgênicas capazes de produzir proteínas para fins farmacêuticos ocorreram somente no final dos anos 80 com a produção de hormônio do crescimento humano em tabaco transgênico e com a produção de albumina sérica humana em tabaco e batata geneticamente modificados em 1990 respectivamente.…”

“…Entretanto, o tabaco possui desvantagens como a grande quantidade de nicotina e alcaloides tóxicos (FISCHER et al, 2004). Muitas outras espécies de plantas têm sido utilizadas como sistema de expressão de proteínas heterólogas, podendo citar os vegetais folhosos (alfafa e alface), os cereais (milho, arroz e trigo), os legumes (batatas), as frutas (tomates e bananas) e as sementes (soja, canola, girassol e tabaco) (EVANGELISTA et al, 1998, GIDDINGS et al, 2000, MENKHAUS et al, 2004, entre outras, cada uma apresentando vantagens e desvantagens.…”

“…Para fins de comparação, YOUNG et al (1997) estimaram que o custo da produção e purificação de uma proteína recombinante produzida no leite de cabra transgênica seria de 105 dólares por grama. Quando se compara este valor ao custo de produção e purificação de uma proteína recombinante produzida por cultivo de células animais, que se encontra entre 300 a 3.000 dólares o grama, a produção de proteínas em plantas transgênicas torna-se ainda mais atrativa (MENKHAUS et al, 2004).…”

“…Além do custo, o cultivo de plantas transgênicas oferece uma série de vantagens, como facilidade de escalonamento, expressão da proteína de interesse em órgãos da planta naturalmente especializados em armazenamento, os quais são desprovidos de proteases e outras atividades enzimáticas (NIKOLOV e HAMMES, 2002), facilidade de armazenamento, risco reduzido de contaminação (com patógenos humanos, endotoxinas e vírus) e modificações pós-traducionais (WILKEN e NIKOLOV, 2012;MENKHAUS et al, 2004;PEREIRA, 2009;MENKHAUS e GLATZ, 2005).…”