The food habit is one of the important information used in the fisheries resource management. This study aimed to determine food preferences, index of preponderance, and trophic level of shortfin scad (D. macrosoma) captured from the southern waters of Gunungkidul Yogyakarta, Indonesia. A total of 325 fish samples were collected from March to September 2018. Each fish sample was measured in total length, body weight, determined its sex, and then dissected. The digestive tract was measured in total length then the gut contents were preserved in 5% formaldehyde to observe the type of food composition. The results showed that shortfin scad was carnivorous fish (relative gut length = 0.47) with the diet composing of fish (84.15%), phytoplankton (8.91%), zooplankton (4.47%), and snipping shrimp (3.19%). The molecular identification showed that the main fish species eaten by shortfin scad was Cololabis saira (Scomberesocoidae).AbstrakKebiasaan pakan ikan merupakan salah satu informasi penting yang digunakan dalam manajemen sumberdaya perikanan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui preferensi pakan, indeks bagian terbesar dan tingkat trofik ikan layang deles (D. macrosoma) yang ditangkap dari Perairan Gunungkidul. Total 325 sampel ikan layang deles dikumpulkan selama bulan Maret sampai dengan September 2018. Setiap sampel ikan diukur panjang total, berat tubuh, ditentukan jenis kelaminnya kemudian dilakukan pembedahan. Saluran pencernaan diukur panjangnya, kemudian isi lambung ikan diawetkan dalam formalin 5% untuk diamati komposisi jenis makanannya. Analisis data meliputi panjang usus relatif, frekuensi kejadian, indeks bagian terbesar, dan tingkat trofik ikan layang deles. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ikan layang deles bersifat karnivora (panjang usus relatif = 0,47) dengan komposisi jenis makanan utama adalah ikan (84,15%). Makanan pelengkap layang deles adalah fitoplankton (8,91%), sedangkan zooplankton (4,47%) dan potongan udang (3,19%) merupakan makanan tambahan. Berdasarkan identifikasi molekuler, spesies ikan yang menjadi makanan utama ikan layang deles adalah Cololabis saira (Scomberesocoidae).