SOLUBILIDADE DA PNEUMOLISINA DESTOXIFICADA (PdT) RECOMBINANTE OBTIDA EM Escherichia coli EMPREGANDO DIFERENTES INDUTORES E MEIOS DE CULTURA

Abstract

RESUMO -O objetivo desse estudo foi a avaliação da solubilidade da proteína pneumolisina geneticamente destoxificada (PdT) recombinante obtida em Escherichia coli produzida nos meios de cultura LB e HDF induzidos por IPTG, S-DAB e de autoindução (AI) induzidos por lactose. Durante os cultivos, alíquotas foram retiradas a cada hora para a leitura da densidade óptica (DO) a 600 nm, os pellets foram ressuspendidos de modo que a concentração celular fosse a mesma em todas as amostras. As suspensões foram lisadas e centrifugadas para separação da fração solúvel e insolúvel. A produção da PdT foi avaliada através da densitometria de banda dos géis de SDS-PAGE. Os meios complexos LB e AI apresentaram produção solúvel semelhante, enquanto os meios definidos HDF e S-DAB levaram à formação de corpos de inclusão. Devido às suas características, o meio AI é a melhor opção para a produção de PdT solúvel em biorreator.