Abstrak: Aplikasi media pembelajaran berbasis web merupakan suatu media yang digunakan dalam kegiatan pembelajaran menggunakan software berbasis web yang didalamnya memuat tentang pembelajaran yaitu judul, tujuan, materi, dan evaluasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui penggunaan aplikasi media pembelajaran berbasis web dan kendala yang di alami mahasiswa dalam menggunakan aplikasi media pembelajaran berbasis web. Penelitian ini dilakukan di Prodi Pendidikan Biologi, Fakultas Ilmu Tarbiyah dan Keguruan UIN Raden Fatah Palembang dengan objek penelitian mahasiswa semester 4 yang mengambil matakuliah aplikasi media pembelajaran berbasis web. Metode penelitian yang digunakan yaitu deskriptif dengan pendekatan kuantitatif. Data dikumpulkan dengan menggunakan angket atau kuesioner. Alat pengumpul data yaitu lembar kuesioner dan analisis data menggunakan teknik analisis deskrisptif kuantitatif. Hasil penelitian menunjukkan aplikasi media pembelajaran berbasis web sudah digunakan oleh mahasiswa pendidikan biologi UIN Raden Fatah Palembang, dimana media pembelajaran ini berdampak pada pembelajaran mahasiswa yang lebih efektif, efisien, menimbulkan sikap demokratis, serta dapat memotivasi mahasiswa dalam kegiatan pembelajaran. Adapun kendala yang dihadapi mahasiswa dalam penggunaannya adalah jaringan internet yang tidak stabilAbstract: Web-based learning application is a media that is used in learning activities using web-based software which contains about learning, namely titles, objectives, materials, and evaluations. This research aims to determine the use of web-based learning media applications and the obstacles experienced by students in using web-based learning media applications. This research was conducted at the Biology Education Study Program, Faculty of Tarbiyah and Teacher Training, UIN Raden Fatah Palembang with the object of research being 4th semester students who took web-based learning media application courses. The research method used is descriptive with a quantitative approach. Data were collected using a questionnaire. Data collection tools are questionnaire sheets and data analysis using quantitative descriptive analysis techniques. The results showed that the application of web-based learning media had been used by biology education students at UIN Raden Fatah Palembang, where this learning media had an impact on student learning that was more effective, efficient, created a democratic attitude, and could motivate students in learning activities. The obstacle faced by students in using it is an unstable internet network.