Synthesis of haptens for immunoassay of organophosphorus pesticides and effect of heterology in hapten spacer arm length on immunoassay sensitivity

Kim, Yoo Jung; Cho, Young Ae; Lee, Hye-Sung; Lee, Yong Tae; Gee, Shirley J.; Hammock, Bruce D.

doi:10.1016/s0003-2670(02)01037-1

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“…From this perspective, this study chose OVA as the coating antigen carrier protein, meanwhile compared with other alternative carrier proteins, OVA also has the advantage of low price. 34 In the present study conjugates use NHS or isobutyl chloroformate as the "bridge" between the hapten and the carrier protein, because on one hand this can prevent the coupled hapten and macromolecular carrier protein being embedded in the bending and cavated molecular structure, and on the other hand the immune activity of the-(GHz) n -chain is low, after immunizing the animals the lymphocyte could secret the structure specific antibody to OLA, which is expected to preparing the high selectivity OLA polyclonal antibodies whose affinity to the spacer is low. 35 Situ adapted the synthesis method developed by McCaughey 34 to couple the bovine thyroxin protein and OLA together to prepare the OLA polyclonal antibody.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Preparation and Characterization of Olaquindox Polyclonal Antibody

et al. 2009

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2-[N-(2-Hydroxyethyl)-carbamoyl]-3-methyl-oxoquinoxaline-1,4-oxides (OLA) was first mono-esterificated by succinic acid anhydride, and was then turned into a derivative with carboxyl. The synthetic product was purified by recrystallization with a yield of 52.47%. Its chemical structure was determined by NMR, IR and MS spectra. The determined structure was used to synthese OLA hapten, which had the molecular structural characteristics of OLA. The OLA hapten and bovine serum albumin (BSA) were conjugated using the activated ester method, while the hapten and ovalbumin (OVA) were coupled by the mixed anhydride method. The UV scanning and infrared spectrum results showed that the hapten and the carrier protein were successfully coupled to BSA and OVA, with the combined ratios of 3.8∶1 and 5∶1, respectively. OLA-BSA was used as the immunogen to immunize four New Zealand white rabbits, and the high titer anti-serum produced relatively. The titers were 1∶6400, 1∶1600, 1∶12800 and 1∶6400, respectively, determined by indirect ELISA OLA-OVA as the coating antigen. The intermediate inhibition concentration (IC 50 ) of OLA in the indirect ELISA test was 743.3 ng/mL. The lowest detection limit (IC 20 ) was 5.71 ng/mL. High-purity OLA polyclonal antibody has been obtained by saturated ammonium sulfate and ion-exchange chromatography.

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Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Preparation and Characterization of Olaquindox Polyclonal Antibody

et al. 2009

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“…Researchers have evaluated the effect on antibody production in respect to the heterology of spacer arm length. In general, it has been observed that spacer arm length of four atoms or more appears to have no or little effect on antigen recognition [11,12]. But heterology in the spacer arm structure of the coating antigen has produced remarkable improvement in a number of enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) [12][13][14][15].…”

Section: Introductionmentioning

confidence: 99%

Application of computer-assisted molecular modeling for immunoassay of low molecular weight food contaminants: A review

Shen

Beier

et al. 2009

Analytica Chimica Acta

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“…El ELISA desarrollado para la determinación de residuos de fentión presenta mayor sensibilidad que los ensayos en placa descritos a la vez en la bibliografía por Kim et al (294,295). Esta mejora podría deberse a la diferencia entre los haptenos utilizadosconjugación a proteína via grupo alcohol para obtener el inmunógeno y mayor heterología con el hapteno de tapizado que carece del grupo tiofosfato-.…”

Section: Tabla 23 Condiciones De Trabajo óPtimas De Los Elisasunclassified

“…Recientemente, Zhang et al (296) han descrito otro ELISA para fentión ligeramente menos sensible (IC 50 de 0,08 ng/mL) inmunizando con un hapteno que posee el brazo espaciador unido al anillo aromático por la posición del átomo de azufre (careciendo de este elemento); como hapteno de tapizado usan uno de los descritos previamente por Kim et al (294). Meses después, estos mismos autores han mejorado las prestaciones del inmunoensayo (297) utilizando una nueva combinación de haptenos de inmunización -con el brazo espaciador unido al anillo aromático-y de tapizado -con el brazo espaciador en el grupo tiofosfato-, obteniendo una IC 50 de 0,01 ng/mL.…”

Section: Tabla 23 Condiciones De Trabajo óPtimas De Los Elisasunclassified

“…La mayor interferencia la presentó el fenitrotión, con un valor de reactividad cruzada del 3,1%, muy inferior al 14% obtenido en el inmunoensayo descrito por Kim et al (294) y al 406% del ELISA desarrollado por Zhang et al (296). El único inmunoensayo que tiene una RC para fenitrotión (4,5%) similar a la del ELISA aquí descrito, es el publicado recientemente por Zhang et al (297).…”

Section: Selectividad Del Ensayo Para Fentiónunclassified

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Inmunoensayos rápidos para la determinación de residuos de plaguicidas organofosforados en aceite de oliva

García¹

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Plaguicidas: medio ambiente y seguridad alimentariaLa contaminación del medio ambiente y de los alimentos es un problema general que afecta a todo el mundo. Parte de dicha contaminación es debida a la aplicación de productos fitosanitarios, especialmente plaguicidas, en agricultura, horticultura y silvicultura.Los plaguicidas son sustancias que sirven para combatir los parásitos de los cultivos, del ganado, de los animales domésticos, y del hombre y su ambiente (1).Aunque estas sustancias se conocen desde la antigüedad, fue a partir de la década 1920-1930, y especialmente después de la Segunda Guerra Mundial, cuando se extendió su empleo -con la aparición de los plaguicidas orgánicos-, con el fin de aumentar la producción de alimentos.En España, desde mediados de los años noventa el uso de plaguicidas experimentó un incremento que vino a romper el fuerte descenso iniciado a finales de la década de los ochenta. Aunque la aplicación de las reformas de la Política Agraria Común (PAC) de 1992 contribuyó parcialmente a reducir su uso, la implantación de sistemas de intensificación agraria aumentó su consumo, agravando el problema. Así, desde 1995 se está produciendo un incremento del uso de plaguicidas, en estrecha relación con la producción agrícola; como puede apreciarse en la Figura 1, en el año 2004 en España se alcanzó la cifra de 3,35 kg por ha (2). La desigual intensificación de la agricultura en las diferentes comunidades autónomas se refleja también en el uso de plaguicidas (Figura 2), que es mucho mayor en Canarias (125,05 kg/ha), Cantabria (28,14 kg/ha) y en las regiones hortícolas, sobresaliendo la Comunidad Valenciana (26,41 kg/ha), la Región de Murcia (22,15 kg/ha) y La Rioja (21,13 kg/ha), como se muestra en la Tabla 1. Los datos del consumo de plaguicidas que se presentan están referidos a venta de producto, sin especificar la composición de su materia activa.El uso indebido de los productos fitosanitarios (dosis excesivas, aplicación reiterada, utilización de productos no permitidos, incumplimiento de los plazos de seguridad, etc.) y la contaminación cruzada entre cultivos puede dar lugar a que las producciones agrícolas contengan residuos de plaguicidas, que potencialmente pueden llegar al consumidor (3, 4). Debe tenerse en cuenta que todos los plaguicidas, como biocidas que son, presentan cierta toxicidad y, por tanto, sus residuos suponen un riesgo para los consumidores si se superan determinados límites.

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Synthesis of haptens for immunoassay of organophosphorus pesticides and effect of heterology in hapten spacer arm length on immunoassay sensitivity

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Preparation and Characterization of Olaquindox Polyclonal Antibody

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Inmunoensayos rápidos para la determinación de residuos de plaguicidas organofosforados en aceite de oliva

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