Objetivo: la presente investigación describe la caracterización química cuali-cuantitativay la evaluación antimicrobiana de los aceites esenciales (AE) presentes en las hojasde dos especies de Eucalyptus, los cuales fueron recolectados en el estado Mérida enla República Bolivariana de Venezuela. Métodos: se realizó la extracción de los AEpor el método de hidrodestilación utilizando la trampa de Clevenger. La composiciónquímica fue evaluada mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría demasas (CG/EM). La actividad antimicrobiana se determinó por el método de difusiónen agar con disco, frente a cepas de referencia internacional Staphylococcus aureus(ATCC 25922), Enterococcus faecalis (ATCC 19433), Escherichia coli (ATCC 25922),Klebsiella pneumoniae (ATCC 23357), Candida albicans (CDC B-385) y Candidakrusei (ATCC 6258). Resultados: los compuestos mayoritarios para la especieEucalyptus globulus fueron: 1,8-cineol (43,36 %), limoneno (15,86 %), β-pineno (14,61 %), α-pineno (9,32 %) y para el Eucalyptus robustus el α-pineno (37,61 %),p-cimeno (11,09 %), α-fellandreno (9,92 %), β-pineno (6,96 %), 1,8-cineol (5,79 %).El AE de E. globulus inhibió el desarrollo de S. aureus una CIM de 0,5 g/mL, E. faecalis0,25 g/mL, E. coli y K. pneumoniae de 0,125 g/mL, y para C. albicans 100 μL/mL y C.krusei 50 μL/mL. Por su parte, la especie E. robustus presento inhibición con una CIMde 0,125 g/mL contra: S. aureus, E. faecalis, E. coli, K. pneumoniae y para C. albicans50 μL/mL y C. krusei 10 μL/mL. Conclusión: los aceites esenciales de E. globulus y E.robustus mostraron actividad antimicrobiana significativa.