Utilização de marcador molecular SCAR na identificação de Fusarium subglutinans, agente causal da malformação da mangueira

Abstract

RESUMO-O gênero Fusarium é responsável por doenças em diversas plantas economicamente importantes. Entre estas doenças, destaca-se a malformação da mangueira, causada pelo fungo Fusarium subglutinans. O objetivo deste trabalho foi desenvolver oligonucleotídeos iniciadores para reação em cadeia da polimerase (PCR), específicos para o fungo F. subglutinans da mangueira. A amplificação de DNA de oito Fusarium spp. de diferentes hospedeiros, usando o oligonucleotídeo randômico UBC-41 (TTAACCGGGG), produziu um fragmento de aproximadamente 1.300 pb somente para o fungo da mangueira. Tendo em vista que padrões de bandeamento por RAPD não são considerados confiáveis devido à baixa reprodutibilidade dos resultados, o fragmento diferencial foi eluído do gel de agarose, purificado, clonado e seqüenciado. As seqüências nucleotídicas foram utilizadas para identificar e sintetizar quatro pares de oligonucleotídeos específicos, denominados Fs 5, Fs 13, Fs 14 e Fs 15. DNAs de Fusarium spp. de outros hospedeiros (alho, amendoim, cana-de-açúcar, ciclâmen, ervilha, melão e trigo), da planta de mangueira cv. Tommy Atkins sadia e de outros cinco isolados de F. subglutinans de mangueira sintomática, foram submetidos à amplificação com os pares de oligonucleotídeos. Fragmentos amplificados foram visualizados somente para F. subglutinans de mangueira, demonstrando assim a especificidade dos oligonucleotídeos SCAR desenhados. Termos de Indexação: oligonucleotídeos iniciadores, Mangifera indica, marcadores moleculares, RAPD-PCR. USE OF MOLECULAR MARKER SCAR IN THE IDENTIFICATION OF Fusarium subglutinans,CAUSAL AGENT OF MANGO MALFORMATIONABSTRACT-The Fusarium genus is responsible for serious diseases in many economically important crops. Among these diseases it is distinguished the mango flower malformation, caused by the fungus Fusarium subglutinans. The objective of this work was to develop specific oligonucleotide primers for the polymerase chain reaction (PCR) targeting the mango flower malformation by fungus F. subglutinans. The DNA amplification of eight Fusarium spp. collected from different hosts making the use of a random oligonucleotide primer UBC-41 generated a fragment of approximately 1300 pb in size, specifically for the mango flower malformation fungus (Fusarium subglutinans). Since standard RAPD banding patterns are not considered reliable because of their low results of reproducibility, the distinctive fragment was eluted off the agarose gel, purified, cloned and then sequenced. The nucleotide sequences were used to identify and also to synthesize four pairs of specific oligonucleotide named herein Fs 5, Fs 13, Fs 14 and Fs 15. Other Fusarium spp. DNAs sampled from other hosts (garlic, peanut, sugarcane, cyclamen, pea, melon and wheat), from a healthy mango tree cv. Tommy Atkins and other six isolates from symptomatic mango plants were submitted to PCR amplification with these pairs of oligonucleotide. Only fragments from the mango tree fungus Fusarium subglutinans were visualized, showing this way the SCAR oligonucleotid...

Molecular identification of mango malformation pathogens in Egypt

“…The RAPD-PCR technique has been used successfully by the Tree Pathology. SDS-PAGE of total proteins of portions and RAPD-PCR were used to elucidate the phylogenetic relationships between Fusarium species [4,11,12]. In many ways, molecular approaches are more easier and can provide results that are less ambiguous and the most important criteria is the same observations can be made between different researchers, as compared to morphological approach.…”

Variabilidade genética de isolados de Fusarium oxysporum f. sp. cubense obtidos de bananais do norte de Minas Gerais

“…Atualmente, diversas metodologias são adotadas visando a estudar a variabilidade genética e a identificação de patógenos, sendo que a maior parte é baseada na utilização de marcadores moleculares (GOUVEIA et al, 2005;ZACCARO et al, 2007).…”

Reação e resistência de porta-enxertos de tomateiro à murcha de fusário

“…A constatação da moderada suscetibilidade (MS) da cultivar 'BHRS 2,3' à raça 3 também foi observada por REIS et al (2004), o que expõe a necessidade de se confi rmar a resistência de cultivares de tomateiro, indicados para áreas com presença da raça 3 do patógeno. A diversidade genética dos fungos é um entrave para o desenvolvimento de cultivares resistentes, visto que muitos fi topatógenos são hábeis na quebra de resistência em um curto espaço de tempo (ZACCARO et al, 2007).…”