Utilização de plasma rico em plaquetas de coelhos com poucos leucócitos e hemácias para a consolidação de ossos

Abstract

Objetivou-se utilizar o plasma rico em plaquetas, obtido por técnica capaz de produzir um produto autólogo, com reduzido número de leucócitos e hemácias, e avaliar, por meio de radiografias, a capacidade de cicatrização de uma falha óssea induzida no rádio de coelhos. Foram coletados 10,5mL de sangue por via intracardíaca, o qual foi distribuído em três tubos de hemossedimentação contendo citrato de sódio. Os tubos contendo as amostras foram submetidos a uma centrifugação a 2.000rpm (670,8G) por 20 minutos, e da coluna de sedimentação foram aspirados de cada tubo 1.000µL de plasma para a redução do volume sobrenadante. Aspirou-se o plasma acima do anel de leucócitos e transferiu-se para outro tubo para centrifugação a 2.000rpm por 10 minutos. O conteúdo plaquetário no fundo do tubo foi ressuspendido e homogeneizado a 1.000µL do plasma sobrenadante para formar o PRP líquido. Uma falha de 1,0cm foi realizada no rádio esquerdo de cada coelho. O tempo de consolidação foi observado por meio de exame radiográfico aos 45 e 90 dias de pós-operatório (PO). As imagens foram comparadas entre o grupo controle (G1) e o grupo que recebeu o implante de PRP por via transdérmica (G2). A evolução da cicatrização foi verificada com auxílio do programa Adobe Photoshop CC e em uma escala de cinza que representa o contraste. No G2 foi verificada média de 63% de contraste aos 45 dias de PO e de 65% aos 90 dias de PO. No G2, aos 45 dias de PO, a média encontrada foi de 42,7%, e aos 90 dias de PO, 31,25%, indicando que houve evolução do processo de reparação óssea em comparação ao grupo que não recebeu o implante de PRP. O método de obtenção de plasma rico em plaqueta autólogo de coelhos reduziu o número de leucócitos e hemácias e recuperou o número de plaquetas, sendo este maior ou igual aos valores fisiológicos para a espécie. O PRP obtido foi capaz de acelerar o processo de consolidação óssea em coelhos.

Protocols for preparation of platelet rich plasma (PRP) in Quarter Horses

“…Platelet rich plasma (PRP) is an autologous biological preparation with regenerative properties conferred by the large concentration of platelets and GFs it contains (Andrade et al 2016), including vascular endothelial growth factor (VEGF), which is the most important angiogenic growth factor, but also promotes vascular permeability and chemotaxis of cells during inflammation (Ng et al 2006). PRP was first described in the 1970s, although the biological functions of GFs contained in PRP were only investigated later (Ross et al 1986).…”

Xenoenxerto ósseo trabecular bovino desmineralizado associado ao plasma rico em plaquetas, em falhas ósseas no rádio de coelhos

“…A atuação desses fatores de crescimento locais e sistêmicos nas diferentes fases da regeneração (inflamação, reparo e modelação) é imprescindível para o recrutamento de células imediatamente após a injúria, assim como para potencializar a produção de tecido ósseo e a adesão de células tronco mesenquimais, responsáveis pelo processo de consolidação e reparação tecidual (ANDRADE et al, 2016). Sendo o uso na reconstrução de tecido ósseo um avanço, visto que plaquetas autólogas foram utilizadas inicialmente apenas com funções hemostáticas, prevenindo ou tratando hemorragias secundárias à trombocitopenia (DONATTI et al, 2013).…”

“…A técnica com a utilização dos tubos de hemossedimentação, descrita por Andrade et al (2016), possibilitou, depois da primeira centrifugação, a formação de uma coluna alta de sedimentação adequada à individualização das camadas de células formadas. Esta coluna alta permitiu a visualização e aspiração do plasma contendo plaquetas acima do anel leucocitário formado, bem como a exclusão dos leucócitos do processo de obtenção do PRP, obtendo uma concentração favorável de plaquetas e leucócitos.…”

“…Embora não houve quantificação e isolamento das metaloproteinases neste experimento, acredita-se que seu aumento tenha sido expressivo.Silva et al (2007) também concluíram que a associação do PRP à hidroxiapatita não aumentou a velocidade de formação óssea e Sánchez et al (2005) adicionaram PRP com xenoenxerto e não notaram diferença na densidade óssea em mandíbulas de cães. Para serem ativadas, as MMPs requerem Ca 2+ para sua ativação, sendo o tecido ósseo um local com bastante predominância deste íon, além da ativação do PRP com gluconato de cálcio, potencializando então sua expressão (OLLIVIER, 2004).O protocolo de obtenção do PRP realizado conformeAndrade et al, (2016) obedeceu às técnicas assépticas, pois nenhum animal apresentou caseum e, através da microscopia, concluímos que também não apresentaram osteomielite, nem presença de infiltrado polimorfonuclear. É importante relatar a baixa de leucócitos presentes no PRP, pois eles podem interferir no processo de cicatrização tecidual(BOSWELL et al, 2012;WASTERLAIN et al, 2012).…”