Выделение, Культивирование И Характеристика Примордиальных Зародышевых Клеток Перепелов

Волкова, Н. А.; Багиров, В. А.; Томгорова, Е. К.; Ветох, А. Н.; Волкова, Л. И.; Зиновьева, Н. А.

doi:10.15389/agrobiology.2017.2.261rus

Cited by 2 publications

(2 citation statements)

References 0 publications

Supporting

Mentioning

Contrasting

Unclassified

Order By: Relevance

“…При дезагрегации эмбрионов кур и перепелов с применением механической и ферментативной обработки мы получили суспензию разобщенных клеток (доля нежизнеспособных не превышала 5 %). В суспензии присутствовали разные типы эмбриональных клеток, разделение которых по адгезии (33) позволило получить популяцию эмбриональных клеток, максимально обогащенную ПЗК. Доля ПЗК от общего числа других типов клеток в культуре эмбриональных клеток кур и перепелов достигала соответственно 88 и 81 %.…”

unclassified

Создание Систем Редактирования Генома На Основе Crispr-Cas9 Для Нокаута Генов Fgf20 И Hr В Эмбриональных И Генеративных Клетках Кур И Перепелов

ВЕТОХ¹

2021

S-h. biol.

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

Технологии геномного редактирования с применением сайт-специфических эндонуклеаз (ZNF, TALEN, CRISPR/Cas9) находят все более широкое применение в животноводстве, в том числе в птицеводстве. С их использованием связывают надежды не только на ускорение процесса создания пород с улучшенными хозяйственно полезными признаками, высокой устойчивостью к инфекционным заболеваниям, но и с созданием особей, несущих фенотипы, привнесение которых в популяции животных и птицы методами традиционной селекции невозможно или затруднено. Одним из направлений применения технологии геномного редактирования, представляющим интерес для промышленного птицеводства в рамках улучшения товарных качеств птицеводческой продукции, может быть создание особей, лишенных оперения. Для этого мы выбрали гены FGF20 и HR, связанные с развитием и ростом волос у млекопитающих (F. Benavides с соавт., 2009) и перьев у птиц (K.L. Wells с соавт., 2012). Цель исследования заключалась в создании системы для нокаута генов FGF20 и HR у кур и FGF20 у перепелов с использованием методов редактирования генома. Инактивацию генов FGF20 и HR проводили в области III экзона каждого гена с учетом анализа их структуры. С использованием биоинформатического инструментария и ресурсов (https://zlab.bio/guide-design-resources, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) были подобраны оптимальные участки разрезания генов FGF20 и HR, а также гидовые РНК и праймеры для амплификации выбранных участков этих генов. Для создания генетических конструкций, обеспечивающих разрезание в областях, кодирующих FGF20 и HR, был выбран вектор pX458 (F.A. Ran с соавт., 2013). Для лигирования использовали гибридизованные олигонуклеотиды: 5´-CACCGAAAGATGGTACTCC-CAGAGA-3´ и 3´-CTTTCTACCATGAGGGTCTCTCAAA-5´ (для гена FGF20 кур), 5´-CACCGTCC-ATGTTTGTACACGTTGG-3´ и 3´-CAGGTACAAACATGTGCAACCCAAA-5´ (для гена FGF20 кур и перепелов); 5´-CACCGACGTGGCTGACGCGGCACT-3´ и 3´-CTGCACCGACTGCGCCA-5´ (для гена HR кур). Эффективность клонирования конструкций подтвердило секвенирование. Полученные плазмиды использовались для редактирования генома эмбриональных (фибробласты) и генеративных (примордиальные зародышевые клетки -ПЗК, сперматогонии) клеток кур и перепелов в экспериментах in vitro. Клетки-мишени трансфицировали посредством электропорации. Эффективность трансфекции оценивали на сортере клеток BD FacsAria III («BD Biosciences», США) по экспрессии маркерного гена eGFP. Доля трансфицированных in vitro эмбриональных фибробластов, ПЗК и сперматогониев кур с нокаутом гена FGF20 достигала соответственно 5,7; 0,9 и 1,2 %, с нокаутом гена HR -7,4, 0,8 и 1,0 %. Процент эмбриональных фибробластов, ПЗК и сперматогониев перепелов с нокаутом гена FGF20 составил соответственно 6,3; 0,9 и 1,1 %. Геномная ДНК была выделена из трансформированных клеток кур и перепелов и использована для амплификации и секвенирования участков генов FGF20 и HR, в которые были внесены делеции. Показано наличие множественных мутаций в амплифицированных участках ДНК. Полученные данные свидетельствуют об успешности создания систем для нокаута генов FGF20 и HR у ...

show abstract

unclassified

Создание Систем Редактирования Генома На Основе Crispr-Cas9 Для Нокаута Генов Fgf20 И Hr В Эмбриональных И Генеративных Клетках Кур И Перепелов

ВЕТОХ¹

2021

S-h. biol.

Self Cite

View full text Add to dashboard Cite

show abstract

“…Среди других методических подходов для безвирусного трансгенеза у птиц можно отметить получение химер при подсадке чужих клеток в эмбрионы. Выделяют клетки ранней бластодермы или примордиальные клетки, инъецируют в их ядра чужеродную ДНК, затем клетки имплантируют в эмбрионы, где они приживаются и делятся (43)(44)(45)(46)(47). Так, J.N.…”

unclassified

ТРАНСГЕННАЯ ПТИЦА — СОЗДАНИЕ И ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ (Обзор)

Korshunova¹

2019

S-h. biol.

View full text Add to dashboard Cite

Технологии трансгенеза в птицеводстве могут быть направлены на улучшение качественных и количественных характеристик продукции (Л.Г. Коршунова, 2011), создание птицы, генетически устойчивой к инфекционным заболеваниям и продуцирующей с яйцом рекомбинантные белки различного назначения (D. Cao с соавт., 2015). Для получения трансгенных животных чаще всего прибегают к микроинъекции ДНК в зиготы. Однако особенности размножения птиц создают серьезные проблемы для исследователей. Курица образует в сутки одну оплодотворенную яйцеклетку, которая очень велика и нежна для каких-либо манипуляций с ней. Для нормального эмбрионального развития ей необходимы третичные оболочки -белковая, подскорлупные и скорлупа. Дробление куриной яйцеклетки начинается уже в белковом отделе яйцевода, а в свежеснесенном яйце имеется 50-60 тыс. клеток. Первая трансгенная птица была получена с помощью ретровирусных векторов. В нормальных условиях ретровирусы сами включаются в геномную ДНК хозяина и реплицируются. На сегодняшний день трансгенные куры и перепела получены посредством ретровирусного (D.W.

show abstract

Выделение, Культивирование И Характеристика Примордиальных Зародышевых Клеток Перепелов

Cited by 2 publications

References 0 publications

Создание Систем Редактирования Генома На Основе Crispr-Cas9 Для Нокаута Генов Fgf20 И Hr В Эмбриональных И Генеративных Клетках Кур И Перепелов

Создание Систем Редактирования Генома На Основе Crispr-Cas9 Для Нокаута Генов Fgf20 И Hr В Эмбриональных И Генеративных Клетках Кур И Перепелов

ТРАНСГЕННАЯ ПТИЦА — СОЗДАНИЕ И ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ (Обзор)

Contact Info

Product

Resources

About