As superfícies em um ambiente hospitalar contribuem para a contaminação cruzada secundária. Tal contaminação acontece através do contato das mãos dos profissionais com a manipulação dos dispositivos ou equipamentos e as suas superfícies, que poderão estar contaminadas e acabar contaminando os pacientes. É importante ressaltar que o comportamento dos profissionais de saúde tem grande influência de maneira direta no que tange a transmissão de infecção hospitalar. O presente estudo objetivou analisar o perfil bacteriano de superfícies e equipamentos do Bloco Cirúrgico de um Hospital Universitário. Trata-se de um estudo transversal e descritivo onde foram amostradas 06 salas do Bloco Cirúrgico e analisadas as seguintes superfícies e equipamentos: braçadeira, mesa cirúrgica, monitor multiparamétrico, oxímetro, foco de luz e carrinho do anestesista. As amostras foram coletadas, utilizando-se um molde de área de 1 cm2 e swabs embebidos em solução salina. O total de bactérias encontradas foi de 125, destas 5 são consideradas bactérias possíveis causadoras de infecções hospitalares, a saber: Acinetobacter baumannii (3 isolados) e Enterobacter sp. (2 isolados). Com relação a resistência, o Acinetobacter baumannii foi 100% resistente aos carbapenêmicos, cefalosporinas e quinolonas. Já os isolados de Enterobacter sp. foram 100% resistente a ampicilina e 100% sensível a sulfametoxazol + trimetropima, cefepima, meropenem, ciprofloxacino, amicacina, ceftriaxona, ampicilina + sulbactam, tetraciclina, cloranfenicol, piperacilina + tazobactam e aztreonam. As superfícies dos equipamentos do Bloco Cirúrgico apresentaram possíveis bactérias causadoras de infecções hospitalares demonstrando elevada resistência aos antibióticos.