Tropical theileriosis is a tick-borne haemoparasitic disease of cattle caused by the protozoan parasite Theileria annulata. Globally, the economic impact of the disease is immense and enhanced control measures would improve livestock production in endemic regions. Immunisation with a live attenuated vaccine is an effective and widely used control method, however, the repeated use of live vaccines may have an impact on the field parasite population at a genetic level. Additionally, there has been an increasing number of reports of vaccine breakthrough cases in recent years. Thus, the present study was designed to evaluate the genetic composition of a parasite population over a disease season in a locality where live cell line vaccination is practised. A diverse range of parasite genotypes was identified and every T. annulata positive cattle blood sample harboured multiple parasite genotypes. An alteration in the major genotype and an increasing multiplicity of infection in individual animals was observed over the course of the disease season. Vaccination status was found not to effect within-host multiplicity of infection, while a significantly higher number of genotypes was detected in grazed cattle compared to non-grazed ones. A degree of genetic isolation was evident between parasite populations on a micro-geographic scale, which has not been reported previously for T. annulata. Analysis of parasite genotypes in vaccinated animals suggested only a transient effect of the vaccine genotype on the genetic diversity of the T. annulata population. The vaccine genotype was not detected among clones of two vaccine 'breakthrough' isolates and there is no suggestion that it was responsible for disease. The obtained data indicated that in the system studied there is no apparent risk of introducing the vaccine genotype into the population with only a transient effect on the genetic diversity of the parasite population during the disease season.

No abstract

Canine leishmaniasis (CanL) is a protozoal disease caused by Leishmania species. Dogs play an important role as a reservoir. The aim of this study is to determine the prevalence of CanL by molecular and serological techniques among stray dogs living in kennels in Aydın, Manisa, and İzmir, located in western Turkey. Blood samples were collected from a total of 191 dogs and analyzed using indirect immunofluorescence antibody test (IFAT) and polymerase chain reaction (PCR). The isolates that tested positive using PCR were further analyzed by real-time PCR for species identification and confirmation. A total of 21 (10.99%) dogs were found to be seropositive by IFAT. Molecular analysis revealed that 8 (4.19%) of the examined dogs were positive for L. infantum/donovani complex and two were found to be positive only by genus-specific PCR. The findings obtained from the screened animals indicate a higher risk of getting an infection caused by a Leishmania spp. in areas where the study was carried out. With this field study, it was obvious that to control the spread of disease into nonendemic areas, preventive measures like application of long-acting topical insecticides to infected and uninfected dogs should be taken. If necessary, positive dogs should be treated according to international guidelines and kept under control.

ÖZAmaç: Theileria annulata popülasyonlarında rekombinasyon sonrası oluşacak genetik çeşitliliğin ve rekombinasyonun yoğun olduğu kromozomal bölgelerin tespit edilmesi amacıyla kullanılacak polimorfik mini ve mikrosatellite markerlerin belirlenmesidir. Yöntemler: Markerlerin belirlenmesi amacıyla Unipro UGENE programı kullanılmıştır. T. annulata'nın rastgele karıştırılmış genomik dizilimlere göre gerçek DNA diziliminde 10 kat fazla tandem tekrar (TR) belirleyen skor, eşik değer olarak belirlenmiştir. Tekrarlı motif benzerliği %96-100 arasında bulunan, minimum tekrar sayısı en az üç ve minimum tandem boyutu minisatellite bölgeler için en az üç nükleotid ve mikrosatellite bölgeler için en az altı nükleotid olan TR'ler suffix array algoritması kullanılarak tüm genom boyunca taranmıştır. Bulgular: Tarama sonrası 359 minisatellite ve 8973 mikrosatellite bölge belirlenmiştir. TR'ler tüm genom boyunca tek tek taranarak; T. annulata'nın kromozomları üzerindeki yerleşim yerlerine, motiflerin benzerliğine (>%96), tekrar sayıları ile tek bölgeyi temsil etmesine, bölgelerin uzunluklarına (<1500 bp) ve primer tasarlanmaya uygun korunmuş bölgeler içermesine bakılarak mini ve mikrosatellite bölgeler belirlenmiştir. Belirlenen bölgeleri çoğaltmada kullanılacak primerler, korunmuş bölgelerden tasarlanmış ve her bir primer, T. annulata'nın farklı izolatları kullanılarak değerlendirilmiştir. Sonuç: Bu çalışmada, T.annulata popülasyonlarındaki çeşitliliğinin belirlenmesi amacıyla daha önce belirlenen markerlere ilave olarak kullanılabile-cek, farklı kromozomlar üzerinde bulunan toplam 13 mini ve mikrosatellite marker seçilmiştir. Anahtar Kelimeler: Theileria annulata, rekombinasyon, satellit marker Geliş Tarihi: 17.06.2016Kabul Tarihi: 21.12.2016 ABSTRACT Objective: Selecting polymorphic mini-and microsatellite markers to determine genetic diversity and chromosomal regions exhibiting elevated rates of recombination in Theileria annulata populations after recombination. Methods: The Unipro UGENE software was used to select markers. A score at which 10 times more tandem repeats (TRs) were identified in the real DNA sequence than those in the scrambled sequences of T. annulata was used as the cutoff. TRs containing minimum three nucleotides in length for microsatellite and six nucleotides for minisatellite regions and having a repeat motif identity between 96%-100% with the unit size repeated minimum three times were screened through the whole genome using the suffix array algorithm.Results: A total of 359 minisatellites and 8973 microsatellites were identified. TRs were screened one by one through the whole genome; mini-and microsatellites representing a single region and having suitable regions for primer design were selected based on their localization on T. annulata chromosomes, their repeat motif identity (>96%), and their repeat length (<1500 bp). The primers used to amplify selected candidates were designed, and each primer was used to check 27 different isolates of T. annulata. Conclusion: In the present study, a total of 13 po...

ÖZAmaç: Bu çalışma, deneysel olarak enfekte edilen gerbillerde (Meriones unguiculatus), klasik tanıdaki smear örnekleri yanında zenginleştiril-miş Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) besiyerine ekim ve Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) testi kullanılarak, Leishmania major amastigotlarının yayılabilme ve visseralize olabilme olasılıklarının gözlenmesi amacı ile gerçekleştirilmiştir. Yöntemler: Çalışmada kullanılan L.major suşu Bitlis ilimiz kırsalında yaşayan ve 18 yaşında olan erkek hastadan izole edilmiştir. Gerbillerin enfeksiyonu için de bu suştan faydalanılmıştır. 10 adet gerbile toplam 1×10 8 /mL dozda promastigot inokule edilmiştir. Enfeksiyonun visseralize olup olmadığı yönünden incelenmesi amacıyla hayvanlara ötenazi uygulanarak nekropsileri yapılmıştır. Nekropside tüm iç organlardan preparatlar hazırlanarak Giemsa ile boyanmış ve promastigot gelişimi için NNN besiyerine ekimler yapılmıştır. Bununla birlikte enfeksiyonu doğrulamak için gerçek zamanlı PZR testi uygulanmıştır. Bulgular: Enfeksiyondan sonraki ilk ayda, L. major ile enfekte edilmiş hayvanlardan alınan ve Giemsa ile boyanan doku örneklerinin muayenesinde, tüm dokularda (karaciğer, dalak, akciğer, böbrek, kalp, testis), Leishmania amastigotlarına rastlanılmış ve yapılan NNN besiyeri ekimlerinde 26°C'de Leishmania promastigotlarının ürediği görülmüştür. Leishmania parazitlerinin ribozomal internal transcribed spacer 1 (ITS1) bölgesine özgü tasarlanan primer ve problar ile gerçek zamanlı PZR testi yardımıyla gerbillerden alınan örneklerin L. major parazitine uygun erime eğrisi gösterdiği görülmüştür. Sonuç: Çalışma neticesinde, Zoonotik Kutanöz Leishmaniasis etkeni olan L.major'un gerbillerde visseralize olduğu hem giemsa ile boyalı preparatlarda, hem de PZR ile doğrulanmıştır. (Turkiye Parazitol Derg 2015; 39: 212- Özgün Araştırma / Original Investigation GİRİŞ Leishmaniasis, tropikal ve subtropikal bölgelerde Phlebotominae ailesine bağlı kum sinekleri tarafından nakledilen ve Leishmania cinsindeki parazitlerin neden olduğu zoonotik karakterli bir hastalıktır (1). Leishmaniasis'de klinik olarak visseral, kutanöz ve mukokutanöz olmak üzere üç farklı tablo ortaya çıkmaktadır (2). Türkiye'de şimdiye kadar visseral leishmaniasis (VL), kutanöz leishmaniasis (KL) ve köpek visseral leishmaniasis (KVL) formları görülmüştür (3). Türkiye, coğrafik olarak leishmaniasisin epidemiyolojisinde önemli olan farklı ekolojik ve klimatik özelliklere sahip bir ülkedir (4). Hastalığın seyri ile coğrafi yayılışı yanında, zoonotik/antroponotik karakterde olması nedeniyle de ayrı bir önem taşıdığına dikkat çekilmektedir (2). Türkiye'de KL'ye neden olan başlıca parazit türü Leishmania tropica olup, az sayıda L. infantum ve nadiren L. major kaynaklı olgular da tespit edilmiştir (5-8). Kutanöz Leishmaniasis oluşturan L. tropica insan-vektör-insan geçişli antroponotik kutanöz leishmaniasis (AKL)'e neden olurken, bir diğer KL etkeni L. major ise ana rezervuarın kemirgenler olduğu zoonotik kutanöz leishmaniasis (ZKL)'e neden olmaktadır (4). Türkiye'de, L. tropica'nın neden olduğu AKL...