ZusammenfassungThrombozytenkonzentrate (TZK) werden gegenwärtig in der Pferdeorthopädie häufig therapeutisch eingesetzt. Bei dieser autologen Therapieform werden Thrombozyten (TZ) in das geschädigte Gewebe appliziert, damit sie ihre heilungsfördernden Wachstumsfaktoren (GF) lokal freisetzen können. Zu den wichtigsten GF für die Gewebsregeneration zählen PDGF-BB (platelet-derived growth factor BB) und TGF-b 1 (transforming growth factor b 1 ). Autologous Conditioned Plasma ® (ACP) stellt eine relativ neue, einfache und schnell aufzubereitende Form eines TZK aus der Humanmedizin dar. In dieser Studie kommt ein patentiertes Doppelspritzensystem (ACP ® -Spritzen) zum Einsatz, dessen optimale Zentrifugationsparameter (Laufzeit und Umdrehungen/Min (U/min)) für die ACP-Herstellung aus Pferdeblut etabliert werden sollen. Diese Parameter wurden anhand der Blutzellen-und GF-Konzentrationen im ACP im Vergleich zu den Basiswerten im Vollblut bestimmt. Im ersten Teil der Studie wurde von zehn gesunden Warmblutpferden ein großes Blutbild angefertigt, um die Basiswerte der Blutzellkonzentration zu erhalten. Die Blutentnahme für die ACP-Proben erfolgte in den ACP ® -Spritzen. Pro Pferd wurden zwölf Proben entnommen. Die Aufbereitung jeder Probe erfolgte in zwölf verschiedenen Varianten, wobei jeweils unterschiedliche Zentrifugationsparameter gewählt wurden (U/min; Laufzeit). Folgende Parameter wurden getestet: 900 (≙127 xg), 1100 (≙189 xg), 1300 (≙265 xg) und 1500 (≙352 xg) U/min mit einer Laufzeit von 4, 5 bzw. 6 Minuten. In jeder ACP-Probe wurden die Blutzellkonzentrationen gemessen und mit den Basiswerten, die vorab im Vollblut bestimmt wurden, verglichen. Daraus resultierte die Bestimmung der Konzentrationen von PDGF-BB und TGF-b 1 nach drei verschiedenen Zentrifugationsregimen (900 U/min x 4 min, 1100 U/min x 5 min und 1300 U/min x 6 min) und deren vergleichende Betrachtung. Im zweiten Teil der Studie wurde konventionelles Plasma von zehn anderen gesunden Warmblutpferden hergestellt und die Blutzellenkonzentrationen sowie die GF-Konzentrationen (TGF-b 1 und PDGF-BB) mit denen aus einer ausgewählten ACP-Probe (1100 U/min x 5 min) für jedes Pferd verglichen, um die Ergebnisse dieser Studie zu validieren. Mit höherer Umdrehungszahl und län-gerer Laufzeit konnte ein tendenzieller Abfall der Thrombozyten-(TZ) und Leukozyten-(LZ) Konzentration beobachtet werden, Erythrozyten (EZ) wurden bei jeder Kombination aus dem Plasma eliminiert. Bei der Kombination 1100 U/min x 5 min lag die Erhöhung der TZ-Konzentration bei 149 % (±20) oder 219 G/L (±61). Die LZ wurden dabei auf 12% minimiert (0,79 x 10 9 Zellen/L). Die Konzentration von PDGF-BB und TGF-b 1 lagen bei 1,58 ng/ml bzw. 1,40 ng/ml. Zwischen den drei ausgewählten Kombinationen zeigten sich keine signifikanten Unterschiede im Hinblick auf die GF-Konzentration. Im Hinblick auf die TZ-, LZ-, GF-Konzentration ergab die Kombination aus 1100 U/min x 5 min im Gesamtbild die besten Ergebnisse.Die TZ-und GF-Werte im ACP waren signifikant höher verglichen mit jenen im konventionellen Pl...

Autologous Conditioned Plasma ® (ACP) is commonly used to treat orthopedic disorders in horses and is characterized by a moderate supra-physiological platelet concentration, which might however be too low to achieve optimal tissue regenerative effect. Because of considerably lower costs and potentially higher platelet concentrations, non-commercial, manual, double-centrifugation tube methods (mPRP) are often employed instead. However, mPRP preparation is tedious and not standardized. In order to determine if an "in-house" mPRP technique can be a valuable alternative to ACP in the practice, the aim of this study was to compare the manual product to the commercial method with respect to their preparation process, platelet activation level (assessed by measuring the mean platelet volume (MPV) and mean platelet component (MPC)), as well as absolute platelet, leukocyte, transforming growth factor-b1 (TGF-b1) and platelet derived growth factor-BB (PDGF-BB) concentrations. For this purpose, all these parameters were determined in ACP, mPRP and its platelet poor plasma (mPPP) obtained from venous blood samples of 10 healthy adult horses. The mean platelet concentration in mPRP reached 221.4 ± 60.3 ×10 9 /l and was 1.2-and 1.4-fold higher than in ACP and mPPP respectively. Mean leukocyte content in mPRP reached 25.8 ±10.9 ×10 9 /l and was 32.3-and 19.9-fold higher than in ACP and mPPP respectively. Mean PDGF-BB level in mPRP (1.81± 0.58 ng/ml) was 1.7-fold higher than both in ACP and mPPP. mPRP showed a 2-and 1.8-fold higher mean TGF-b1 concentration (3.62 ±1.16 ng/ml) than ACP and mPPP respectively. MPC reached 20.3 ±1.3 g/l in mPRP, 20.6 ±1.6 g/l in ACP and 20.4 ±1.7 g/l in mPPP. MPV was 8.6 ± 0.7 fl in mPRP, 8.7 ±1.0 fl in ACP and 8.4 ± 0.9 fl in mPPP. ACP preparation was easily performed, whereas mPRP processing was laborious and time-consuming. Compared to ACP, the "in house" mPRP method achieved a slightly higher mean platelet concentration in a much smaller end-volume, though. Mean leukocyte, TGF-b1 and PDGF-BB levels in mPRP were significantly above the values in ACP and mPPP, which both showed similar results. The high mean leukocyte concentration in mPRP could possibly induce unwanted local inflammatory reactions. Platelet activation degree did not differ between the three products. The mPRP processing method described in this study should therefore first be adjusted and optimized before being recommended for extensive use in horses. Compared to other equine platelet concentrates reported in the literature, mPRP and ACP both showed low absolute platelet and GF levels; further comparative clinical studies are needed to determine if these values were sufficient to induce a satisfactory clinical effect.

Storage of ACP® at -20 °C could be useful in equine practice, but, before this procedure can be recommended, further qualitative tests are needed. The mechanical stimulation technique should be adjusted in order to increase platelet activation.