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RESUMO -O biodiesel é uma mistura de ésteres alquílicos de ácidos graxos que podem ser obtidos a partir da reação de transesterificação dos triglicerídeos de origem animal ou vegetal com álcoois, sendo uma alternativa substituição do convencional diesel de petróleo. A sua produção pode ser realizada pela catálise enzimática, processo que se torna ainda mais vantajoso quando se utiliza a lipase imobilizada. Neste trabalho, testamos diversos tipos de imobilização de lipases em esferas de quitosana, a fim de avaliar a estabilidade da enzima. Foram realizados testes com imobilização uni e multipontual, utilizando ativação com glicidol e com glutaraldeido. A eficiência foi analisada em virtude do rendimento de reações de produção de biodiesel, utilizando etanol e óleo de soja, e também da estabilidade frente a diversos usos. Assim, foi possível a produção de um derivado enzimático capaz de alcançar 47% de rendimento na síntese de biodiesel, sendo estável após 10 usos mantendo sua atividade inicial. INTRODUÇÃOO biodiesel é uma mistura de mono-alquil ésteres de ácidos graxos obtidos a partir da transesterificação dos triglicerídeos de origem animal ou vegetal com álcoois de cadeia curta, sendo uma alternativa da substituição do convencional diesel de petróleo. (DERMIBAS, 2008). Sua obtenção poder ser realizada via catálise química ou via catálise enzimática.São diversas as vantagens de se empregar lipases como catalisadores, tais como a possibilidade de utilização de condições suaves de reação evitando a formação de subprodutos, além da possibilidade de maior controle e eficiência do processo (GARCIA et al, 2000). Lipases (triacilglicerol éster hidrolases, EC 3.1.1.3) são produzidas por microorganismos (fungos e bactérias), animais e plantas. As enzimas comerciais são derivadas principalmente de fontes microbianas devido aos baixos custos de produção e da facilidade de manipulação de suas propriedades (ANTCZAK, 2009). As lipases podem ser classificadas segundo a sua especificidade em relação à molécula ácida ou alcoólica do substrato. A lipase de Thermomyces lanuginosus, utilizada neste trabalho, é uma lipase 1,3 específica, liberando os ácidos graxos das posições 1 e 3 (CASTRO, 2004).A imobilização de enzimas em um suporte sólido é uma tecnologia importante para a estabilização e melhoramento da atividade da enzima, sendo este processo dependente das interações químicas que ocorrem entre o suporte e as moléculas da enzima (POPPE, 2013).