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Mutations in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) channel cause cystic fibrosis. Chaperones, including HSC70, DNAJA1 and DNAJA2, play key roles in both the folding and degradation of wild-type and mutant CFTR at multiple cellular locations. DNAJA1 and HSC70 promote the folding of newly synthesized CFTR at the endoplasmic reticulum (ER), but are required for the rapid turnover of misfolded channel at the plasma membrane (PM). DNAJA2 and HSC70 are also involved in the ERassociated degradation (ERAD) of misfolded CFTR, while they assist the refolding of destabilized channel at the PM. These outcomes may depend on the binding of chaperones to specific sites within CFTR, which would be exposed in non-native states. A CFTR peptide library was used to identify binding sites for HSC70, DNAJA1 and DNAJA2, validated by competition and functional assays. Each chaperone had a distinct binding pattern, and sites were distributed between the surfaces of the CFTR cytosolic domains, and domain interfaces known to be important for channel assembly. The accessibility of sites to chaperones will depend on the degree of CFTR folding or unfolding. Different folded states may be recognized by unique combinations of HSC70, DNAJA1 and DNAJA2, leading to divergent biological effects. Autosomal recessive cystic fibrosis (CF) is one of the most common lethal genetic diseases in the North American and European populations 1. Typical outcomes include meconium ileus in newborns, pancreatic insufficiency, and recurrent lung infection due to bacterial colonization with uncontrolled inflammation, leading to the airway destruction and respiratory failure, the predominant cause of mortality in CF patients 2. CF is caused by mutations in the ABCC7 gene encoding the Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator (CFTR), a transmembrane channel that has a critical role in regulating transepithelial movement of water and electrolyte in epithelial cells. CFTR allows the flow of Cl − and HCO 3 − ions to maintain hydration, for example in lung airways. CF mutations in the channel render it dysfunctional or unstable. The most common mutation in CFTR is ΔF508, but many others are known 2,3. CFTR is a member of the ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily with the typical two transmembrane domains (TMD1 and TMD2), alternating with two cytosolic nucleotide-binding domains (NBD1 and NBD2) (Fig. 1a). Each TMD contains six transmembrane helices and two cytosolic loops (L1 and L2 in TMD1, L3 and L4 in TMD2). There is an additional N-terminal (NT) extension in the cytosol, and a unique regulatory (R) region lies between NBD1 and TMD2 (Fig. 1a) 3. Homology models and structural studies including recent high-resolution cryo-EM structures of the full-length channel, established the arrangement of its domains 4-7. The NT region packs onto the sides of L1 and L4, NBD1 is assembled onto the tips of L1 and L4, and NBD2 onto L2 and L3 4-7. In the unphosphorylated nucleotide-free state, the channel is closed at the extracellular si...

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A corona floral é uma estrutura típica das flores da família Passifloraceae. A elucidação dos mecanismos responsáveis pela formação da corona é de extrema importância para a compreensão dos processos evolutivos que permitiram a diversificação das interações com polinizadores nas espécies desta família. Este trabalho teve por objetivo identificar e caracterizar fatores de transcrição (FT) preferencialmente expressos na corona em Passiflora spp. Para tal, o banco de etiquetas de genes expressos (ESTs) PASSIOMA foi investigado e 139 cDNAs foram identificados: 69 derivados de bibliotecas florais de P. edulis, 68 de P. suberosa e 2 de P. pohlii. No intuito de atribuir identidades às sequências realizou-se uma análise de parcimônia, com a obtenção de cladogramas que permitiram a identificação de membros de 31 famílias gênicas de fatores de transcrição em Passiflora spp. Experimentos de macroarranjo mostraram que 9 genes putativos, codificadores de fatores de transcrição, apresentaram expressão nos filamentos da corona. Para a caracterização mais completa desses fatores de transcrição, foram realizados experimentos de RT-PCR em 5 destes 9 genes e hibridização in situ com dois dos 5 genes analisados por RT-PCR. Os resultados obtidos com RT-PCR indicaram que estes genes são expressos nos tecidos da corona mas também em folhas e outros órgãos florais. Os resultados da hibridização in situ confirmaram que os genes encontrados não são especificamente expressos na corona.

que tornou possível a realização desta tese de doutorado através do apoio financeiro concedido pela bolsa de doutorado no país (processo 2014/00076-0) e pela bolsa estágio de pesquisa no exterior (BEPE -processo 2016/03764-0). À Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) agradeço imensamente pela oportunidade de frequentar desde a graduação uma das melhores universidades do país, o que me propiciou um profundo crescimento profissional e humano. Em particular, agradeço aos Institutos de Biologia e de Química, pelo Programa de Pós-Graduação em Biologia Funcional e Molecular e pela magnífica infra-estrutura e equipe de funcionários que possibilitam o desenvolvimento de pesquisa e ensino de altíssima qualidade. Também agradeço aos funcionários e às instalações do CNPEM (Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais), onde se situam o LNBio (Laboratório Nacional de Biociências) e o LNLS (Laboratório Nacional de Luz Síncronton) e onde foram realizados alguns experimentos aqui mostrados. Ao Prof. Dr. Carlos H. I. Ramos pela oportunidade de trabalhar em seu laboratório, pela orientação ao longo desses anos e pela extensa contribuição para minha formação, tanto em caráter teórico e experimental, quanto em caráter científico, estimulando o pensamento crítico e propondo novas idéias. Ao Prof. Dr. Jason Young e à McGill University, pela possibilidade de desenvolver um projeto de pesquisa numa das universidades mais conceituadas no exterior, contribuindo para meu amadurecimento científico e pessoal. Aos membros da banca examinadora pela contribuição intelectual nesta etapa final do trabalho para que a tese ficasse a melhor possível, particularmente agradeço ao Prof. Dr. Claudio C. Werneck e à Profa. Dra. Juliana H. C. Smetana que participaram também da banca da qualificação. A todos os demais professores que de alguma forma participaram da minha formação, desde o ensino básico até a pós-graduação. Em especial agradeço à Profa. Dra. Fernanda R. Gadelha e ao Prof. Dr. Eduardo de F. Peloso por terem despertado em mim, durante a iniciação científica, o interesse e a curiosidade necessários no início da carreira; e ao Prof. Dr. Marcelo C. Dornelas, meu orientador durante o mestrado, pelos diversos ensinamentos em biologia molecular e vegetal.A todos os integrantes, passados e presentes, do grupo de pesquisa do Prof.Carlos Ramos pelo apoio, ótima convivência e compartilhamento de experiências ao longo desses anos. Particularmente agradeço a minha amiga Aline, pelas conversas, conselhos e boas horas de almoço (mesmo que no bandejão). Agradeço também aos membros do grupo do Prof. Jason Young, Michael, Yogita, Jeff, Imad e Sam pela gentileza, recepção, ótima convivência e por terem feito minha adaptação muito mais fácil.Aos meus amigos proteicos, Anne, Gláucia, Natália e Josi, por todas as discussões, gritarias, risadas, aconselhamentos e conversas no (café) laboratório e fora dele.Com certeza vocês fizeram o trabalho cotidiano muito mais produtivo e divertido, "como se fossemos amigos". Em especial, agradeço muito a essas duas ...