Three recombinant plasmid constructs, expressing chimeric proteins containing human ubiquitin fused to an ectodomain of one of the potentially protective proteins (p30, p54 and CD2v) of the attenuated MK-200 strain of African swine fever virus (ASFV), were created as potential inductors of specific antiviral cellular immunity. Three-time immunization of pigs with the mixture of these plasmids led to the formation of virus-specific cytotoxic T-lymphocytes (CTL), but did not induce production of virus-specific antibodies. After challenge with the homologous parental virulent ASFV strain M-78 at a dose of 103 HAD50, all five animals (four immunized pigs and one naïve) fell between the 4th and 7th days post infection. The obtained results demonstrated that induction of CTL did not protect pigs against challenge with the virulent ASFV. Balanced activation of CTL and antibody-mediated cellular mechanisms should be investigated.

No abstract

No abstract

Чума мелких жвачных (ЧМЖ, peste des petits ruminants)-высококонтагиозная, остро или подостро протекающая вирусная болезнь овец и коз, характеризующаяся язвенными поражениями слизистой оболочки ротовой полости, лихорадкой, поражением лимфоидной системы, развитием пневмонии, геморрагическим гастроэнтеритом (A. Diallo с соавт., 1989; T.M. Ismail с соавт., 1995). Из-за высокой заболеваемости (50-100 %) и смертности (50-90 %) ЧМЖ относится к числу опасных заболеваний, наносящих значительный экономический ущерб (R.A. Kock с соавт., 2015). Возбудитель болезни-вирус ЧМЖ (род Morbillivirus, сем. Paramyxoviridae) антигенно связан с другими морбилливирусами (G. Libeau с соавт., 2014). Степень проявления клинических признаков заболевания зависит от линии вируса ЧМЖ, вида, породы, иммунного статуса животных. Поэтому окончательный диагноз должен быть подтвержден в лаборатории. Для диагностических и мониторинговых серологических исследований предпочтение отдается технологичному и чувствительному методу иммуноферментного анализа (ИФА). Современные средства серодиагностики ЧМЖ разрабатываются на основе вирусоспецифичных рекомбинантных белков, в первую очередь нуклеокапсидного (N) белка (M. Munir с соавт., 2013; Н.В. Вавилова с соавт., 2006.), который по антигенным и иммуногенным характеристикам превосходит остальные белки морбилливирусов (M. Yunus с соавт., 2012). Белок N-наиболее консервативный антиген из протеинов вируса ЧМЖ (M. Muhammad, 2013). Целью представленной работы было получение рекомбинантного нуклеокапсидного белка вируса чумы мелких жвачных для использования в качестве антигена и вирусоспецифичных антисывороток свиней как источника антител для серодиагностики заболевания методом конкурентного ИФА. Была получена конструкция, несущая последовательность фрагмента гена белка N длиной 1530 п.н. в составе экспрессирующего плазмидного вектора pET32a. Скрининг полипептидов методом SDS-PAGE и в иммуноблоттинге выявил клоны Escherichia coli pET32а/N/10, экспрессирующие вирусоспецифичный мажорный полипептид с молекулярной массой 70 кДа. Проведенные нами исследования показали, что оптимальная доза очищенного методом металлохелатной хроматографии рекомбинантного белка N в конкурентном ИФА составила 0,25 мкг на лунку. Соотношение результатов реакции с отрицательной и положительной контрольными сыворотками коз при OD 450 составило 11,52. Таким образом, очищенный электрофоретически и иммунохимически чистый рекомбинантный белок N пригоден для применения в конкурентном ИФА для серодиагностики ЧМЖ. Для получения специфичных антисывороток свиньям вводили очищенный вирус ЧМЖ. Титры антител в пробах антисывороток крови свиней в реакции нейтрализации (РН) с вирусом ЧМЖ составили 1:64-1:128. Эти значения были сопоставимы с титрами антител в сыворотках крови у вакцинированных против ЧМЖ овец и коз (А.В. Константинов с соавт., 2017). Однако при конкурентном ИФА антисыворотки свиней оказались менее эффективными по сравнению с положительной козьей сывороткой. Ключевые слова: чума мелких жвачных животных, морбивирусы, диагностика, рекомбинантны...