RESUMO:Humulus lupulus L., Cannabaceae, é usada como sedativo e ansiolítico na medicina popular. O método de HPLC-DAD-ESI-MS n representa uma ferramenta poderosa para a análise de produtos naturais, desde que ela fornece o espectro de UV e informações estruturais sobre os constituintes da mistura. O objetivo deste trabalho foi o de caracterizar os constituintes encontrados no extrato hidroalcoólico. Os constituintes 1-9 foram tentativamente caracterizados através do UV/DAD e ionização por electrospray (MS/MS) depois da separação usando fase reversa, tempo de retenção e dados da literatura. Os principais compostos fenólicos (baseados na área dos picos) foram caracterizados como ácido hulupínico (9), coulupona (8), dois alfaácidos amargos oxidados (principais constituintes), um deles sendo um derivado da coumulinona oxidada (5) e o outro um derivado da humulinona oxidada (7), junto com uma procianidina B (3) e os flavonoides rutina (4) e o canferol-7-O-rutinosídeo (6). Esta planta conhecida devido às suas propriedades ansiolíticas e por ser um componente da cerveja, mostrou derivados oxidados de alfa-ácidos, como principais constituintes do extrato hidroalcoólico. Unitermos: Humulus lupulus, flavonoides glicosídeos, derivados de alfa-ácidos amargos oxidados, HPLC/DAD/MS/MS.ABSTRACT: Humulus lupulus L., Cannabaceae, is commonly used as light sedative and anxiolytics in folk medicine. HPLC-DAD-ESI-MS n represents a powerful tool for the analysis of natural products, since it can simultaneously provide a UV chromatogram and significant structural information about compounds in complex mixture. The aim of this work was characterize the constituents present in hydroethanolic extract. Compounds 1-9 were tentatively characterized on the basis of UV, MS/MS, after reversed phase separation, retention time and literature data. The main phenolic compounds (based on peak area) were characterized as hulupinic acid (9), cohulupone (8), two oxidized hop alfa-bitter acids (principal constituents), one being a oxidized cohumulinone (5) and the other an oxidized humulinone (7) derivatives, together with a procyanidin dimer B (3), flavonoids rutin (4) and kaempferol-7-O-rutinoside (6). This plant known, due to anxiolytic property and beer flavoring, showed oxidized hop bitter acids, as principal constituents, in its hydroethanolic extract.