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ZusammenfassungFiir den Nachweis von VTEC in Lebensmitteln und F~izes wird ein Verfahren vorgestellt, das nach optimierter Anreicherung sowohl einen sensitiven VT-Screening-Schritt (alternativ ELISA oder PCR) als auch eine Methode zur gezielten Isolierung der VTEC beinhaltet. Die VT-positiven Isolate miissen dann nach biochemischer Best~itigung als E. coli und Serologie-molekularbiologisch auf zus~itzliche Virulenzmarker untersucht werden. Als geeignetes Anreicherungsmedium fiir Lebensmittel und F~izes stellte sich mTSB heraus. Das Sch/.itteln der Kulturen und der Mitomycin-C-Zusatz erh6hten die Nachweisempfindlichkeit fiir VT erheblich. Fiir das VT-Screening aus der 18h-Kultur sind der selbstentwickelte VT-Rezeptor-ELISA,,BgVV,,, der kommerzielle Premier-EHEC und die PCR (MKI/MK2) alternativ einsetzbar. SummaryA procedure for the detection of VTEC in foods and faeces A procedure for the detection of VTEC in foods and faeces is presented. This procedure includes an optimized enrichment, sensitive VT-screening tests by using ELISA or PCR and a specific isolation of VTEC/EHEC. The VT-positive isolates must be confirmed as E. coti by means of biochemical methods. Furthermore serotype and other virulence factors have to be detected.A suitable nutrient medium for VTEC-enrichment in foods and faeces is mTSB. Shaking and addition of Mitomycin C to the nutrient medium increase the sensitivity of VT-detection considerably. The self-developed VT-receptor-ELISA,,BgVV,,, the commercial available Premier-EHEC and PCR (MKI/MK2) are alternatively applicable for VTscreening after enrichment. In case of VT-positive samples a specific serovare-independent isolation by using of VT-Colony-Immunoblot is following. The isolation rate is more than 90 %. A combination of this method with the immunomagnetic separation (IMS) is recommended in case of EHTEC O157. The detection limit of the whole procedure is approximately 10 CfU/25 ml or 25 g of foods. Reproducible results are also found after deepfreezing or storing samples in refrigerator before testing (milk > 8 d at -20 °C, minced meat > 14 d at-20 °C, feacaI samples > 8 d at +4 °C). Soft cheeses and raw sausages have to be examined immediately without storage.

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ZusammenfassungWir haben in vom Tier stammenden Lebensmitteln, wie roher Milch (einschliefflich Vorzugsmilch), rohem oder unzureichend gegartem Hackfleisch und rindfleischhaltiger Rohwurst STEC nachgewiesen, isoliert und charakterisiert. We-.gen ihrer geringen Anzahl im Vergleich zur Gesamtkeimflora 1st ein spezielles Verfahren hierzu erforderlich. Die STECIsolate wurden mittels PCR-Verfahren auf das Vorhandensein yon Genen ffir zehn Virulenzfaktoren (stxl, stx2, eae, hlyA, katP, espP, etpD, astA, colD157 und SummaryDetection of shigatoxin producing Escbericbia coli (STEC) in foods and characterization of isolates We detected STEC in foods of animal origin like raw milk including certified milk, raw or undercooked minced beef and beef containing raw sausage. Furthermore we isolated and characterized the STEC. The number of STEC in the total bacterial count is low. A multistep procedure was to be performed including two-step enrichment, sensitive screening tests, methods for specific STEC isolation and characterization. The STEC isolates were checked for the existence of genes of encoding ten virulence factors (stxl, stx2, eae, hlyA, katP, espP, etpD, astA, colD157, and ileX) by using PCR. All genes of these virulence factors could be detected in isolates from raw milk and with exception of katP in raw minced beef, too. The genes katP, etpD, colD157 and ileX could not be detected in isolates from raw sausage. One isolate from this matrix belonged to serogroup O22:H8 and had the gene combination eae, hlyA, and espP. 15,2 % of the investigated STEC isolates from raw milk had the stx-genes and besides the factors hlyA, katP, espP, and etpD. In addition, 9,1% of these isolates showed the genes eae and colD157. One isolate from minced beef had the combination stx2, hlyA; espP, etpD, and eae. All these isolates belonged to serogroup O157.Furthermore, we investigated 28 EHEC strains belonging to serogroup O157. These isolates were obtained from patients suffering from HUS. The combination eae, hlyA, etpD, katP, and espP was found in 18 cases (64 %). EHEC strains belonging to other serogroups isolated from stool samples of HUS patients showed different combinations of virulence factor genes. In the serogroups 026, O103 and O111 the combination eae, hlyA, and etpD was frequent. The genes for the virulence factors were distributed sporadically in ten EHEC isolates of different serogroups from patients suffering from diarrhoea and in 17 isolates from carriers showing no symptoms.Einleitung

385-395HELMA KLrE l) und F. MACH (Eingegangen a m 11.8.1967) Labyrinthuleen gelten als hochgradig heterotrophe Organismengruppe. Sie sind charakterisiert dnrch die Bildung netzformiger Pseudoplasmodien, in denen spindelformige Zellen cinzeln oder zu mehreren a n verzweigten, miteinander verbundenen Faden entlangwandern (KLIE u. SCHWARTZ 1963). Einige Arten kommen parasitar auf Algen und anderen Wasserpflanzen vor, konnen aber auch Mikroorganismen als Nahrstoffquelle benutzen. Auf Seewasseragar kultivierte Labyrinthula coenocystis-Stamme greifen Eubakterien, Pseudoinonas-Arten und Hefen an. Die Zellen werden innerhalb weniger Tage his zu mikroskopisch nachweisharen Membranresten abgebaut. Zur naheren Charakterisierung der Erniihrungsanspruche von Lab. coenocystis-Stammen stellten wir uns die Aufgabe, die von Labyrinthula-Enzgrmen beeinflufiten Bakterien-oder Hefezellen licht-bzw. elektronenmikroskopisch zu untersuchen. Material uncl iYethodenLabyrinthula coenocystis-Stamme wurden auf petonhalt'igem Meerwasseragar von Algen und Seegras (Zostera marina) isoliert (SCHIOLLER 1960, KLIE u. SCHWARTZ 1963). Sie lieBen sich auf synthetischem Seewasseragar unter Zusatz von DiFCo-Casamino acids, DIBCO-Hefeextrakt and einer Leitungsu.assersusperision autoklavierter Torulopsis fa,mata-Zellen kultivieren. Die Stamme wurden alle 3 -5 Tage auf neue Platten ubertragen und in fenchter Kammer bei Zimmert'emperat'ur (18-25 "C) aafgestellt (KLIE 1965).Gelegentlich auftrctende Bakt,erieninfektioneri lieBen sich durch Antibioticazusatz (100 y Streptomycinsulfat + 100 I E Penicillin G/ml Nahrsnbst'rat) beseitigen. Alle Versuche winden mit dem von Seegras isolierten Stamni I, durchgefuhrt. Fur die Lebendbeobachtungen im Phasenkontrast eigneten sich am besten ObjekttragerkuIturen. Objckttrager mit eineni 1 -2 mm dicken Seewasseragarfilm wurden einseitig mit einem gut bewachsenen Agarblockchen einer 3-5 Tage alten Labyrinthula-Kultur beimpft. Das Impfstiick hatte Kontakt zu einer gleichmallig verteilten Leitungswassersuspension lebender Futterorganisnien. Die Kulturen standen in feuchter Karnmer bei Zimmertemperatur. Auf ihre Eignung als Futterorganismen wurden folgende Bakterien und Hefearten unter-Die Vorkultur der Eubakterien und Pseudomonas-Arten erfolgto auf X i h a g a r (0,Sqb Fleischext'rakt', 0,50/6 Pept'on, 2% Agar; pH 7,2; 24-36 Std. bei 30 "C) nnd die der Myco-1) Derzeitige ilnschrift : 45 Dessau, Heinrich-Hcine-Str. 9