A tintura de Jatobá é utilizada popularmente no tratamento de infecção urinária. Todavia, faz-se necessário determinar segurança e eficácia destes produtos a fim de assegurar a qualidade e evitar riscos à saúde do consumidor. O presente estudo objetivou determinar os parâmetros físico-químicos e investigar os grupos fitoquímicos da tintura de Jatobá (Hymenaea spp.), bem como avaliar sua atividade antimicrobiana frente à Escherichia coli, em amostras produzidas na Oficina de Remédios Caseiros do CENEP – Nova Palmeira – PB. Para a avaliação físico-química foram realizados ensaios de pH, densidade e sólidos totais. Os grupos fitoquímicos foram identificados por reações químicas específicas e o teor de fenólicos expresso em ácido tânico, por espectroscopia UV-VIS. Para a comprovação da eficácia antimicrobiana, foi utilizado o método de difusão em ágar. Os resultados obtidos da análise da tintura de jatobá revelaram uma mistura homogênea de coloração castanho avermelhada, pH médio de 5,11 ± 0,01, densidade 0,9237 ± 0,01 sólidos totais 3,37 ± 0,02 e teor de polifenóis entre 3,46% e 3,77%. A tintura apresentou eficácia antimicrobiana frente a E. coli, com halos de inibição em média de 11,6 ± 0,06 mm, apresentando assim, uma boa capacidade de inibição. As características avaliadas são importantes na determinação da qualidade do produto e para a realização de estudos posteriores de estabilidade, além de evidenciar o potencial antimicrobiano contra a E. coli, principal bactéria relacionada a infecção urinária, servindo de incentivo para a realização de novos estudos com abordagens químicas e farmacológicas sobre o jatobá.