Background Nerve growth factor (β-NGF) from llama seminal plasma has been described as a potent ovulatory and luteotrophic molecule after intramuscular or intrauterine infusion in llamas and alpacas. We tested the hypothesis that systemic administration of purified β-Nerve Growth Factor (β-NGF) during the preovulatory stage will up-regulate steroidogenic enzymes and Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) gene expression in granulosa cells inducing a change in the progesterone/estradiol ratio in the follicular fluid in llamas. Methods Experiment I: Female llamas ( n = 64) were randomly assigned to receive an intramuscular administration of: a) 50 μg gonadorelin acetate (GnRH, Ovalyse, Pfizer Chile SA, Santiago, Chile, n = 16), b) 1.0 mg of purified llama β-NGF ( n = 16), or c) 1 ml phosphate buffered saline (PBS, negative control group, n = 16). An additional group of llamas ( n = 16) were mated with a fertile male. Follicular fluid and granulosa cells were collected from the preovulatory follicle at 10 or 20 h after treatment (Time 0 = administration of treatment, n = 8/treatment/time point) to determine progesterone/estradiol concentration and steroidogenic enzymes and VEGF gene expression at both time points. Experiment II: Granulosa cells were collected from preovulatory follicles from llamas ( n = 24) using ultrasound-guided transvaginal follicle aspiration for in vitro culture to determine mRNA relative expression of Steroidogenic Acute Regulatory Protein (StAR) and VEGF at 10 or 20 h ( n = 4 replicates) and progesterone secretion at 48 h ( n = 4 replicates) after LH or β-NGF treatment. Results Experiment I: There was a significant increase in the progesterone/estradiol ratio in mated llamas or treated with GnRH or purified β-NGF. There was a significant downregulation in the mRNA expression of Aromatase (CYP19A1/P450 Arom) for both time points in llamas mated or treated with GnRH or llama purified β-NGF with respect to the control group. All treatments except β-NGF (20 h) significantly up regulated the mRNA expression of 3-beta-hydroxysteroid dehydrogenase (HSD3B) whereas the expression of StAR and Side-Chain cleavage enzyme (CYP11A1/P450scc) where significantly up regulated only by mating (20 h), or β-NGF at 10 or 20 h after treatment. VEGF was up regulated only in those llamas submitted to mating (10 h) or treated with purified β-NGF (10 and 20 h). Experiment II: Only β-NGF treatment induced an increase of mRNA abundance of StAR from llama granulosa cells at 20 h of in vitro culture. There was a significant increase on mRNA abundance of VEGF at 10 and 20 h of in vitro ...

P450 side-chain cleavage (P450scc/CYP11A1), steroidogenic acute regulatory protein (STAR), and 3β-hydroxysteroid dehydrogenase (HSD3B1) at 10 and 20 h of treatment. Application of the MAPK inhibitor U0126 resulted in downregulation of the genes encoding these enzymes. β-NGF also enhanced progesterone synthesis, which was prevented by the prior application of the MAPK inhibitor U0126. Finally, western blot analysis confirmed that β-NGF activates the ERK1/2 signaling pathway. In conclusion, our results indicate that β-NGF exerts direct luteotropic effects on llama ovarian tissue via the ERK 1/2 pathway.

El objetivo del presente estudio fue evaluar la tasa de producción de embriones in vitro hasta el estadio de blastocisto con dos medios de fertilización: FERT-TALP y TCM-199 modificado, cultivado en el medio BOEC, a partir de ovocitos recolectados por aspiración folicular de ovarios de vacas criollas obtenidos del matadero. Se recolectaron 281 ovocitos, 179 para el medio FERT-TALP y 144 para TCM-199 modificado. Los ovocitos fueron sometidos al proceso de maduración, fecundación y cultivo embrionario in vitro. Se obtuvo una tasa de clivaje de ovocitos de 25.8% en FERT-TALP y 2.4% en TCM-199 modificado a las 18 horas pos-fertilización. Asimismo, a las 48h se obtuvo 87.7% de clivaje total en FER-TALP y 40.5% en TCM-199 modificado, cuyo porcentaje de embriones con 4 a 8 células fue de 64.5 y 26.2% respectivamente. En la fase de mórula y blastocisto se alcanzó una tasa de 10.3 y 3.9% en FERT-TALP, respectivamente, mientras que ninguno se logró con el medio TCM-199 modificado.

El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de GnRH, hCG y eCG aplicados 14 días después de la inseminación artificial a tiempo (IATF) fijo sobre la tasa de preñez y sobrevivencia embrionaria y fetal en vacas sometidas a estrés calórico. Las vacas (n=234) fueron sincronizadas e inseminadas y recibieron diferentes dosis hormonales vía i.m. 14 días después: a) Grupo control: 2 ml de suero fisiológico (n=56), b) Grupo GnRH: 100 µg de GnRH (n=58), Grupo c) hCG: 1500 UI de hCG (n=60), y d) Grupo eCG: 400 UI de eCG (n=60). El diagnóstico de gestación y la evaluación del número de cuerpos lúteos (CL) se determinó mediante ultrasonografía a los días 34, 45 y 60 de la IA. Las vacas tratadas con GnRH presentaron una mayor tasa de preñez (p<0.05) y sin diferencias significativas entre los demás grupos. La sobrevivencia embrionaria y fetal entre los días 45 y 60 fue constante en todos los grupos, pero ocurrió una muerte fetal en el grupo eCG. No hubo diferencia significativa en la proporción de cuerpos lúteos accesorios entre los grupos tratados y el grupo control a los 60 días de gestación. Se concluye que la administración de GnRH 14 días pos-IATF mejora la tasa de preñez en vacas lecheras sometidas a estrés calórico.

No abstract