Bacillus thuringiensis (Bt) toxins are effective in controlling insect pests either through the spraying of products or when expressed in transgenic crops. The discovery of endophytic Bt strains opened new perspectives for studies aimed at the control of sapsucking insects, such as the Asian citrus psyllid Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae), a vector of "Candidatus Liberibacter spp.," associated with citrus huanglongbing (HLB). In this study, translocation of endophytic Bt strains in citrus seedlings inoculated with Bt suspension delivered by soil-drench, and their systemic pathogenicity to D. citri nymphs were investigated. The pathogenicity of three wild-type Bt strains against D. citri third-instar nymphs was demonstrated. Among the 10 recombinant strains tested (each of them harboring a single cry or cyt gene), 3 can be highlighted, causing 42%-77% and 66%-90% nymphal mortality at 2 and 5 d after inoculation, respectively. The isolation of Bt cells from young citrus shoots and dead nymphs, and PCR performed with specific primers, confirmed the involvement of the Bt strains in the psyllid mortality. This is the first report showing the translocation of Bt strains from citrus seedling roots to shoots and their potential to control D. citri nymphs that fed on these soil-drench inoculated seedlings. The Bt strains that caused the highest mortality rates have the potential to be used as bioinsecticides to control D. citri and the identified genes can be used for the production of transgenic Bt citrus.

Desenvolvimento de sistemas de aquisição de Bacillus thuringiensis porBacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria entomopatogênica utilizada como biopesticida contra insetos, principalmente Lepidoptera, Coleoptera e Diptera, e na produção de organismos geneticamente modificados. Com a descoberta da capacidade de Bt se movimentar sistemicamente em plantas, potencialmente atingindo insetos sugadores, surge uma nova possibilidade para o controle de Diaphorina citri Kuwayama, que transmite bactérias associadas ao Huanglongbing, uma séria doença da citricultura. O objetivo do trabalho foi desenvolver sistemas de aquisição de Bt por D. citri, in vitro e in planta, para estudos de patogenicidade. Uma estirpe de Bt transformada com o gene green fluorescent protein (Btk-gfp), cultivada em meio NYSM, foi usada como marcador de aquisição pelo inseto e movimentação nas plantas. Para o sistema de aquisição in vitro, selecionaram-se dietas com base na sobrevivência e atividade alimentar de D. citri. Btk-gfp foi adicionada à dieta selecionada, composta por uma solução de sacarose a 30% em água mineral com corantes alimentícios (verde 0,1% e amarelo 0,4%). A dieta foi acondicionada em um sachê formado por duas membranas de Parafilm®, sobre a parte inferior de uma placa de Petri de 40 mm de diâmetro (gaiola de alimentação). Dez insetos foram confinados em cada gaiola para períodos de acesso à aquisição (PAA) de até 48 h, estabelecendo-se 10 gaiolas por tratamento; como controle, utilizou-se a dieta sem Btk-gfp. Para testes de aquisição in planta, suspensões de Btk-gfp foram inoculadas em ramos novos cortados e no solo, próximo à haste de seedlings de laranja doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e de murta [Murraya paniculata (L.) Jack], e em diferentes concentrações, avaliando-se a movimentação da bactéria após um período de 48 h. Posteriormente, adultos e ninfas de D. citri foram confinados nestas plantas para avaliar a aquisição de Btk-gfp, usando-se plantas inoculadas apenas com água como controle. Para os bioensaios de patogenicidade a D. citri, 21 estirpes de Bt foram testadas no sistema de aquisição em ramos cortados de murta e 5 estirpes em ramos cortados de laranja para ninfas de 3º. ínstar. In vitro, testaram-se 3 estirpes contra ninfas de 3º. ínstar e 9 contra adultos. Bt-gfp foi absorvido pelas raízes e ramos novos cortados de seedlings de laranja doce e de murta, e translocado até as folhas, mostrando movimentação sistêmica. Esta estirpe foi adquirida por adultos e ninfas de D. citri que se alimentaram nos ramos novos cortados, mantidos em suspensão bacteriana. O sistema de alimentação in vitro permitiu a aquisição de Bt-gfp (pellet ressuspendido na dieta de sacarose com corantes) por adultos de D. citri com apenas 12 h de PAA, mas 30 h é um período ótimo para exposição do inseto ao sistema. Nenhuma das nove estirpes testadas no sistema in vitro foi patogênica aos adultos de D. citri. Das 21 estirpes testadas contra ninfas de 3º. ínstar em ramos novos de murta, cinco causaram mortalidade de 24 a 45%, em 5 dias. Essas ci...